[发明专利]一种不结球白菜游离小孢子培养技术

摘要

本发明涉及一种不结球白菜游离小孢子培养技术，属于生物技术领域，专用于不结球白菜游离小孢子培养。包括取材、消毒，接种小孢子密度为1×10^5－6个/ml，置于35℃高温诱导24～48h，25℃黑暗条件下培养暗培养15～20d、植株再生与继代培养、移栽，采用培养基中加入质量比0.1％的秋水仙素处理或在移栽时用质量比0.1％的秋水仙素浸泡幼根使得染色体加倍。应用此技术，诱导不结球白菜基因型成功率达68.5％，平均每个花蕾诱导胚4～10个，最高可达92个以上。

主权项

1.一种不结球白菜游离小孢子培养技术，包括：取材：选取处于单核晚期至双核早期的干净无污染花蕾，将花蕾保湿置于4℃冰箱中保存；消毒：选取花蕾用75％的酒精消毒30s，然后用质量比为0.1％的HgCl2消毒5min，最后用无菌水冲洗3次待用；接种：把消毒后的花蕾置于离心管中加入B5液体培养基用玻璃棒轻轻挤压使小孢子游离出来，用400目虑网过滤，然后800rpm离心5min，弃上清，重复3次，最后加入NLN液体培养基，使小孢子密度达到1×105-6个/ml，获得小孢子悬浮液；高温诱导：把小孢子悬浮液分装于培养皿中，立即置于35℃高温下黑暗处理24～48h；暗培养：将上述高温诱导处理后的小孢子悬浮液置于25℃黑暗条件下培养，15～20d后可以看到有胚状体出现；植株再生与继代培养：胚状体生长15d以后，挑选子叶型胚转于生芽培养基中培养，25d以后，转于生根培养基中生根；移栽：生根的试管苗移栽于营养钵中练苗，经过练苗以后，定植于大田；染色体加倍：采用在上述生芽培养基、生根培养基中分别加入质量比浓度为0.1％的秋水仙素处理使得染色体加倍，或者在移栽时采用质量比浓度为0.1％的秋水仙素浸泡幼根处理8h使得染色体加倍。