[发明专利]一种上皮组织癌前病变转基因动物模型的制作方法

摘要

本发明涉及上皮细胞癌前病变转基因动物模型，将构建的双癌基因转入(C57BL/6J♀×CBA♂)受精卵获得F₀首建鼠，首建鼠与野生型C₅₇BL/6J小鼠交配，自然生产得仔鼠，设计一对双基因检测引物，用PCR法筛选仔鼠，得G₁代转基因阳性杂合仔小鼠，经同胞或同宗G₁阳性异性小鼠交配得G₂代，以同样方法繁殖获得纯系转基因后代；对转基因小鼠不同器官组织中双癌基因的表达检测和定量分析，在F₀和G₃代组织中均检测到双基因的表达，其中，以鼻腔和鼻咽部位的表达水平最高；对转基因小鼠病理组织切片检查，在G₃代8月龄小鼠的切片中，鼻腔与鼻咽粘膜均出现明显病变；本发明制作的上皮细胞癌变转基因动物模型的双癌基因可稳定遗传，为上皮细胞癌变的机理和防治研究提供有价值的动物模型。

主权项

1、一种上皮组织癌前病变转基因动物模型的制作方法，包括构建pLMP1-p53mt重组表达质粒，重组表达质粒的体外表达，转基因模型首建鼠的获得，转基因模型动物的繁殖与筛选，其特征在于将获得的转基因首建鼠F0与野生型C57BL/6J小鼠交配，自然生产，获得仔鼠，然后设计一对引物，用PCR法筛选得到G1代转基因阳性杂合子小鼠，再将同胞或同宗G1代阳性异性小鼠交配，获得G2代，继续以同样方法繁殖筛选，以获得纯系转基因后代，引物上游序列为：5′-GCC ATA CCA CAT TTG TAG AG-3′；引物下游序列为：5′-TCC CAG TAA ATG GAG GGA G-3′。