[发明专利]快速筛选产利迪链菌素的利迪链霉菌突变株的方法

摘要

本发明公开了一种快速筛选产利迪链菌素的利迪链霉菌突变株的方法，由如下步骤组成：(1)培养基的配制；(2)种子培养及发酵；(3)样品的制备；(4)傅里叶变换红外光谱分析；(5)数据处理；(6)再经红外数据的主成分分析及人工神经网络分析，能快速筛选出产利迪链菌素的利迪链霉菌突变株，本发明确定了一种适合利迪链霉菌及其突变株快速筛选的方法，可以大幅度提高诱变菌株的筛选速度，提高诱变的工作效率。

主权项

1.一种快速筛选产利迪链菌素的利迪链霉菌突变株的方法，其特征由如下步骤组成：(1)培养基的配制：①摇瓶种子培养基的配制：取葡萄糖1～5克，可溶性淀粉10～20克，酵母浸粉0.5～1.5克，蛋白胨1～3克，磷酸氢二钾0.2～1.0克，氯化钠0.1～0.5克，硫酸镁0.1～0.5克，加水至500ml，混匀，分装至锥形瓶中，每瓶50ml，灭菌；②摇瓶发酵培养基的配制：取葡萄糖2～5克，可溶性淀粉10～30克，蛋白胨0.5～1.5克，磷酸氢二钾0.1～1克，氯化钠0.1～0.5克，硫酸镁0.1～0.5克，加水至500ml，分装，每瓶45ml，灭菌；(2)种子培养及发酵：①摇瓶种子培养：将利迪链霉菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及不产利迪链菌素的利迪链霉菌突变株K、利迪链霉菌突变株S和利迪链霉菌突变株Z分别接入摇瓶种子培养基中，25～30℃，200～250转/分钟，培养36～60小时，制得摇瓶种子液；②摇瓶发酵培养：将所述摇瓶种子液按照体积百分含量为8～12％的接种量接入摇瓶发酵培养基中，25～30℃，200～250转/分钟培养；(3)样品的制备：①菌体的获得：从摇瓶发酵培养12小时开始取样，每隔12小时取一次样，至少取5次，4000～6000转/分钟，离心10～20分钟，菌体用质量/体积百分比为0.5％NaCl水溶液洗涤2～4次，经4000～6000转/分钟离心10～20分钟，洗涤后的菌体真空冷冻干燥后备用；②KBr晶片的制备：取3～5mg干燥后的菌体与150～300mg的干燥KBr置于玛瑙研钵中充分研磨后，装入模具中在7×107Pa～10×107Pa的压力下将样品粉末压成KBr锭片；(4)傅里叶变换红外光谱分析：用红外分光光度计测定红外光谱，分辨率为4cm-1，扫描范围4000～400cm-1，扫描结果为15～25次扫描的平均值；(5)数据处理：采用归一化法；(6)再经红外数据的主成分分析及人工神经网络分析，筛选出能产利迪链菌素的利迪链霉菌突变株。