[发明专利]一种在食管癌病人血清中检测肿瘤相关标志物的方法

摘要

本发明涉及一种在食管癌病人血清中检测肿瘤相关标志物的方法，以血清为分子探针，免疫沉淀肿瘤细胞中潜在的肿瘤抗原，富集的肿瘤抗原－抗体复合物经SDS－PAGE电泳分离、考马斯亮蓝染色、特异蛋白条带的酶解消化，肽段抽提，反相高效液相色谱(RP－HPLC)分离和电喷雾离子化偶联在线离子阱质谱(ESI－IT－MS)鉴定等综合技术路线，筛选食管癌血清标志蛋白。筛选到的Ku70蛋白经免疫印迹实验证实为新的食管癌候选标志物，Ku70蛋白表达明显增高与早期食管癌癌变相关。

主权项

1、一种在食管癌病人血清中检测肿瘤相关标志物的方法，其特征在于：A、采集食管癌病人外周血样本，在离体后2-3小时内于4℃温度下离心并分离上层血清，获得肿瘤血清；B、采集健康人外周血样本，在离体后2-3小时内于4℃温度下离心并分离上层血清，获得对照血清；C、提取体外培养的细胞株总蛋白；D、用所述病人的肿瘤血清免疫沉淀所述细胞株总蛋白中的肿瘤自身抗原分离得到肿瘤抗原-抗体复合物；同时，用所述的对照血清免疫沉淀所述细胞株总蛋白，得到非特异的免疫复合物；E、用SDS-PAGE电泳，按分子量大小分离所述的肿瘤抗原-抗体复合物，获得泳道1蛋白；同时，用SDS-PAGE电泳，按照分子量大小分离所述的非特异免疫复合物，获得泳道2蛋白；F、对比所述的泳道1蛋白和泳道2蛋白，切下肿瘤特异表达的蛋白条带，对该蛋白条带进行胶内胰蛋白酶酶解消化、肽段抽提、混合肽段液相色谱分离和电喷雾离子化偶联在线离子阱质谱蛋白属性鉴定，得到特异的肿瘤相关标志物。