[发明专利]淮山(山药)组织培养方法

摘要

本发明涉及一种淮山(山药)种苗的组织培养方法。所述方法，包括外植体——块芽的获取；块芽的消毒；接种和大棚假植等步骤。本发明的创新点在于：1.以块芽为外植体。该方法具有种苗病毒少，接种有效率高，遗传性稳定等特点；2.改进组培程序，省略诱导生根的环节，具体做法是把高度达4～5厘米的健壮的芽苗从基部切下，将芽苗基部切口在50毫克/升的NAA溶液中浸泡后，直接扦插入已消毒的细沙中假植，并施以稀释的MS无机盐溶液作养分，所述改进可以减少组培的综合生产成本。本发明，能使淮山优质组培苗真正走出实验室，实现大规模工厂化生产。

主权项

1、一种淮山(山药)组织培养方法，包括以下步骤：(1)外植体——块芽的获取，获取块芽包括以下步骤：(A)选取健壮、表面无病虫害的块茎，用200倍新洁尔灭或0.1％高锰酸钾消毒，每隔10分钟左右喷洒一次，至少3次，然后用自来水冲洗干净，晾干，再切成每块10～12cm放在通风处让创面收干；(B)6小时后放在已消毒的湿沙中沙藏催芽，温度保持在20～30℃之间，20天左右可以获得块芽；(2)块芽的消毒：块芽长出来后，直径大约0.6cm左右，用已消毒刀片切下，并切去根须，先用少量洗洁精液浸泡，再用自来水冲洗干净；进入接种室，将已清洁的块芽放在超净工作台上，用75％酒精消毒10秒，再用无菌水冲洗至少3次，然后用0.1％升汞加几滴湿润剂吐温80，灭菌4～6分钟，分两次进行，每次灭菌后都要用无菌水冲洗至少5次，灭菌完成即可进行外植体接种；(3)接种：包括以下程序：(A)将事先配好的培养基按常规方法灭菌后冷却、凝固待用，培养基由基本培养基(MS)附加2～3％的蔗糖、0.5～3.0mg/L的苄基腺嘌呤(6-BA)和0.01～0.1mg/L的萘乙酸(NAA)构成；(B)将接种工具(刀、镊子、无菌盘等)都在火焰上烧灼消毒后待冷却使用；(C)用镊子将块芽夹到无菌盘中，接种到已灭菌的培养基中，然后放进培养室中培养，20～30天，可长出芽苗；(4)大棚假植：在芽的增殖继代过程或在继代增殖培养结束时，把高度达4～5厘米的健壮的芽苗从基部切下，并切除基部可能带有的愈伤组织；将芽苗基部切口在50毫克/升的NAA溶液中浸泡1～2小时后，直接扦插入已消毒的细沙中假植，并施以稀释的MS无机盐溶液作养分，2～3周即可见到叶色转绿并有相当数量的新根萌发，待生长稳定后，移栽于大田。