[发明专利]柠檬马鞭草的组织培养快速繁殖方法

摘要

一种柠檬马鞭草的组织培养快速繁殖方法，采用柠檬马鞭草的含节幼嫩茎段为外植体，灭菌时采取在灭菌液中用软毛刷不断刷拭材料尤其是腋芽部位的方法控制污染，接种初期采用转换培养基和暗培养的方法控制材料的褐化，然后依次在经筛选的腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中培养，腋芽能正常萌发生长并迅速进入增殖状态，获得完整试管苗，将该试管苗移栽在蛭石和腐殖质土的苗床上，一个月后便可植入大田。采用本方法繁殖柠檬马鞭草，不受外界条件的影响，四季皆可进行，不仅节约育苗占地，降低生产成本，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。

主权项

1、一种柠檬马鞭草的组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：1)外植体灭菌：选取柠檬马鞭草主干基部幼嫩枝条，去除叶片，放在洗洁精水中浸洗，经自来水冲洗后放入70％的酒精中搅拌15～20秒，取出立即转入含吐温-80的饱和漂白精溶液中浸泡9～10分钟，其间不断用软毛刷刷拭腋芽部位，取出用无菌水冲洗3～4次后用灭菌吸水纸将水吸干，继而切取邻近顶芽的幼嫩含节茎段作外植体，迅速接种在MS培养基上，放入暗处培养，第二天将材料转接到新的MS培养基上；2)腋芽诱导：将在MS培养基上不再褐化的外植体转入诱导培养基MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.1mg/L+琼脂7.0g/L+蔗糖30g/L，pH5.8，培养温度为25±2℃、光照周期12h.d-1、光强度为1200lux；3)腋芽增殖：切取诱导培养中单个芽，去除2/3叶片，切取含节的茎段接种到增殖培养基MS+6-BA0.25～0.5mg/L+NAA0.1mg/L+琼脂7.0g/L+蔗糖30g/L，pH5.8，培养温度为25±2℃，光照周期14h.d-1，光强度为2000lux；4)生根诱导：剪取增殖培养中长度为1.5～2.0cm的健壮的芽接种到生根培养基1/2MS+IBA0.5mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖25g/L，pH5.8，培养温度为20±2℃、光照周期10h.d-1、光强度为1000lux；5)炼苗移栽：选择根长2～5cm、苗高3～5cm的小苗，加无菌水炼苗5-7天，然后洗掉根部琼脂培养基，移栽于装有高温灭菌过的蛭石和腐殖质土比例为1∶1的苗床上，浇足水，上罩以薄膜，在温室内继续培养，湿度控制在70％，温度20±2℃，光照周期10h.d-1，光照强度1000lux，逐渐恢复自然状态下温湿度，一个月后移入大田。