[发明专利]耐盐基因作为植物遗传转化筛选标记基因的方法与应用

摘要

本发明是一种采用来源于真核生物的耐盐基因作为植物遗传转化筛选标记基因的方法与应用。该方法包括耐盐基因的克隆、转化载体的构建、植物遗传转化和转化植物鉴定等步骤。本发明开创了利用耐盐基因作为植物转化筛选标记基因的途径，能够代替目前广泛使用的通过抗生素或者抗除草剂基因作为筛选标记基因存在的弊端，能够获得具有生物安全性和生态安全性的转化植物，利于生物和环境保护等优势，必将促进转基因植物的商业化应用，以及今后植物基因工程的发展。

主权项

1.一种植物遗传转化筛选标记基因的方法，其特征是一种采用来源于真核生物的耐盐基因作为植物遗传转化筛选标记基因的方法，包括以下步骤：a.耐盐基因的克隆：通过PCR方法，将来源于真核生物的gpp即甘油磷酸酶、gpd即3-磷酸甘油脱氢酶、hal、dhh、SOS1基因克隆后测序，得耐盐基因，b.转化载体的构建：将耐盐基因连接到酶切后的质粒表达载体即植物双元转化载体pBI 121或者pCAMBIA上，分别命名为pBI或pA8系列质粒，通过冻融法转入农杆菌菌株EHA105，c.植物遗传转化：通过农杆菌介导的转化方法转化高等植物，在含有不同氯化钠浓度的筛选再生培养基上筛选获得转化苗，转化苗再通过在含盐生根培养基生根，获得完整的再生植物即转化植物，d.转化植物的鉴定：通过测定β-glucoronidase即β-葡苷酸酶活性鉴定是否转化成功。