[发明专利]从鲜鹿茸中提取胰岛素样生长因子－1的方法

摘要

本发明公开了一种从鲜鹿茸中提取胰岛素样生长因子－1(IGF－1)的方法，属于从鹿茸中提取活性成分的技术。利用pH9～12的碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液、碳酸氢钠－氢氧化钠缓冲液或稀氨水与稀酸配制而成的碱性溶液为提取剂，通过超声波强化浸提、超滤浓缩、去脂、酸解、离子交换层析、第二次超滤和冷冻干燥等步骤提取鲜鹿茸中的IGF－1等活性多肽。采用本发明技术，IGF－1的提取率可以达到3200～3500ng IGF－1/g鲜鹿茸；而采用去离子水作提取剂，在相同工艺条件下IGF－1的提取率仅为1000ng IGF－1/g鲜鹿茸以下。制得的产品可应用于医药、保健品等诸多方面。

主权项

1.一种从鲜鹿茸中提取胰岛素样生长因子-1的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)超声波强化浸提：将鲜鹿茸在4～10℃条件下粉碎，然后按质量比加入3～10倍的pH9～12的碱性溶液作提取剂，提取温度为20～30℃，超声功率为120～250w，超声浸提时间为30～60min；超声浸提结束后在-4℃下5000～10000r/min离心20min；然后沉淀部分加入3～5倍的同样缓冲液，重复上述步骤；合并两次离心所得上清液；(2)超滤浓缩：在10～20℃条件下，利用孔径为10kDa～20kDa膜将步骤(1)所得上清液进行超滤浓缩；(3)去脂：将超滤浓缩液转入去脂锅内，于5min内加热到45～55℃，立即在冰水浴中降温至0～5℃，静置3～4h，分离出下层清液；(4)酸解：利用1mol/l盐酸或1mol/l醋酸，将步骤(3)所得下层清夜调节pH至4～6，会有沉淀析出；在-4℃下，以10000r/min的速度离心20min，除去沉淀，收集上清液；(5)离子交换层析：将步骤(4)制得的上清液直接加到阳离子交换柱上，用0.5～2.0mol/NaCl洗脱，收集含有胰岛素样生长因子-1的洗脱峰溶液。交换柱使用的填料是葡聚糖型或纤维素型弱酸性阳离子交换树脂；(6)第二次超滤：利用孔径为2～6kDa超滤膜将步骤(5)得到的胰岛素样生长因子-1洗脱液进行脱盐、浓缩，收集浓缩液；(7)冷冻干燥：将步骤(6)所得浓缩液在-20℃下预冷冻，然后在-40℃～-60℃下用冷冻干燥机进行干燥。