[发明专利]细胞培养与产品回收的工艺方法及其一体化系统

摘要

一种细胞培养与产品回收的工艺方法及其一体化系统，该系统包括细胞培养罐，再通过排液管连至储液罐内，依次经排液管连至色谱柱及废液罐，在培养罐与储液罐、储液罐与色谱柱间设蠕动泵，另设受控于一pH调控仪的加酸、加碱的蠕动泵，加酸、加碱蠕动泵入口端分别外接酸、碱液，两泵的出口均接入储液罐内；pH调控仪的pH复合电极浸入储液罐内的培养上清液面中。该工艺方法是将工程细胞培养后平衡并扩张；入储液罐达到预定体积时，打开pH调控仪和加酸、碱蠕动泵、色谱柱进液蠕动泵电源开关，上柱；达到色谱柱允许的容量后切换在线洗脱阳离子扩张床色谱柱，进行目标蛋白的洗脱，得到粗产品；将粗产品上柱，用缓冲液继续淋洗，收集蛋白主峰洗脱组分。

主权项

1、一种细胞培养与产品回收的工艺方法，其特征在于方法步骤如下：1)将工程细胞依次在方瓶、搅拌瓶、转瓶中培养，待工程细胞密度达到1×105～1×106细胞/ml后转入小B布朗生物反应器中培养，待细胞密度达到5×105～5×106细胞/ml后再转入大B布朗生物反应器培养：2)将在线洗脱阳离子(streamline SP)扩张床色谱柱用平衡缓冲液平衡并扩张到50～70厘米；3)将经过消毒灭菌的细胞培养与产品回收的一体化系统与上述大B布朗生物反应器连接，当工程细胞培养液流入储液罐并达到1/2～2/3体积时，将pH调控仪和加酸碱蠕动泵的电源打开并将pH值设定在5～6之间，打开色谱柱进液蠕动泵电源开关并将流速调至50～100ml/分钟，上柱；4)达到色谱柱允许的容量后切换在线洗脱阳离子(streamliane SP)扩张床色谱柱，并将柱上端与紫外检测器连接，下端连接一个蠕动泵，进行目标蛋白的洗脱，得到重组人尿激酶原粗产品；5)用磷酸盐缓冲液平衡聚苯烯酰胺(Sephacryl S-200HR)凝胶色谱柱一个柱体积，将粗产品上柱，用同种缓冲液继续淋洗，收集蛋白主峰洗脱组分。