[发明专利]细胞色素 P450BM－3 单加氧酶变体基因及其用途无效
| 申请号： | 200410089167.6 | 申请日： | 2004-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN1637141A | 公开（公告）日： | 2005-07-13 |
| 发明（设计）人： | 梅乐和;李红梅;姚善泾 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12P17/10 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310027浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种细胞色素P450BM－3单加氧酶变体基因及其用途。它通过易错PCR技术介导的随机突变，筛选获得的P450BM－3变体基因，该P450BM－3基因中的第168位的天冬氨酸的密码子GAT突变为天冬酰胺的密码子AAT，第225位的丙氨酸的密码子GCA突变为缬氨酸的密码子GTA，将第440位赖氨酸的密码子AAA突变为天冬酰胺密码子AAT所得到的P450BM－3变体基因(Asp168→Asn，Ala225→Val，Lys440→Asn)P450BM－3。该变体基因序列为SEQ ID No.1核苷酸序列，并且编码细胞色素P450BM－3的单加氧酶。本发明创造了一种对吲哚具有更高催化活力的P450BM－3变体基因，该变体基因表达的突变酶能构催化吲哚生成染料靛蓝，与R.D.Schmid领导的科研小组获得的具有三个突变位点的P450BM－3(Phe87Val，Leu188Gln，Ala74Gly)变体酶相比较，在测定的一例中活性提高了1.9－2.4倍，为生物转化生产染料靛蓝提供了广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 色素 p450bm 单加氧酶 变体 基因 及其 用途 | ||
【主权项】：
1.一种细胞色素P450BM-3单加氧酶变体基因，其特征在于：通过易错PCR技术介导的随机突变，筛选获得的P450BM-3变体基因，该P450BM-3基因中的第168位的天冬氨酸(Asp)的密GAT码子突变为天冬酰胺(Asn)的密码子AAT，第225位的丙氨酸(Ala)的密码子GCA突变为缬氨酸(Val)的密码子GTA，将第440位赖氨酸Lys的密码子AAA突变为天冬酰胺Asn的密码子AAT所得到的P450BM-3变体基因(Asp168→Asn，Ala225→Val，Lys440→Asn)P450BM-3。该变体基因序列为SEQ IDNo.1核苷酸序列，并且编码细胞色素P450BM-3的单加氧酶。
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