[发明专利]A－NK细胞分离培养方法

摘要

A－NK细胞分离培养方法是一种医学肿瘤生物治疗学的方法。用如下方法对A－NK细胞分离培养进行了改进。用苯丙氨酸甲酯(PME)去除单核巨噬细胞而不改变淋巴细胞的表型和细胞毒性；在A－NK细胞培养方法的改进中，无血清培养基可替代含血清的完全培养基，二者所得培养物的数目和功能相当，发展无血清培养基用于A－NK细胞的临床生物治疗，即不减少A－NK细胞的数量和活性，又能增加其临床应用的安全性；IL－4可联合IL－2对A－NK细胞的生长有较强的刺激或成熟作用；IL－2和IL－12联合应用可提高活化免疫细胞的杀伤活性。

主权项

一种A-NK细胞分离培养方法，其特征在于培养过程中：在A-NK细胞分离方法的改进中用苯丙氨酸甲酯(PME)可有效去除单核巨噬细胞而不改变淋巴细胞的表型和细胞毒性。具体方法是取健康人外周血，肝素抗凝，用PBS二倍稀释后，用人淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，2000转/分，20分钟，吸取中界面层的单个核细胞用PBS洗涤三次。然后，置于塑料管中用PME(5mmol/L)室温处理40分钟(5×106/ml)，以去除B细胞和单核巨噬细胞，将PME处理过的已去除单核巨噬细胞的PBMC调细胞浓度为5×106/ml置于完全培养液中，与22nM(6000IU/ml)IL-2共同培养4-5小时后，收集粘附于塑料培养瓶表面的细胞(即A-NK细胞)进行临床治疗，将收集细胞的时间从传统的24-48小时缩小到3-5小时；在A-NK细胞培养方法的改进中，无血清培养基可替代含血清的完全培养基，二者所得培养物的数目和功能相当。发展无血清培养基用于A-NK细胞的临床生物治疗，即不减少A-NK细胞的数量和活性，又能增加其临床应用的安全性；IL-4可联合IL-2对A-NK细胞的生长有较强的刺激或成熟作用；IL-2和IL-12联合应用可提高活化免疫细胞的杀伤活性。