[发明专利]外胚间充质干细胞的分离和培养方法

摘要

本发明涉及生物细胞技术领域中的外胚间充质干细胞的分离和培养方法，其特征在于：所述方法包括外胚间充质干细胞培养基的配制、外胚间充质干细胞的分离和培养、外胚间充质干细胞的纯化步骤。用本发明方法制备的外胚间充质干细胞可用于骨组织工程、肌肉组织工程、外周神经修复和牙组织工程。本发明方法简单，重复性强，操作简便，为有关外胚间充质干细胞的科研、教学、临床应用等能起到不可估量的作用，同时孕育着巨大的社会效益和经济效益。

主权项

1、外胚间充质干细胞的分离和培养方法，其特征在于：包括外胚间充质干细胞培养基的配制、外胚间充质干细胞的分离和培养、外胚间充质干细胞的纯化，具体步骤有：(1)外胚间充质干细胞培养基的配制：a.取最低必需培养液DMEM和培养液F12按1∶1混合而成的基础培养液；b.向基础培养液中加入胎牛血清、L-谷氨酰铵、碳酸氢钠、青霉素/链霉素、碱性成纤维细胞生长因子、牛垂体提取物和白血病抑制因子，搅拌混匀；c.调pH为7.4-7.5，超净台抽滤消毒，保存备用；(2)外胚间充质干细胞的分离和培养：a.在无菌条件下，切取自愿终止妊娠的40-50天胎儿或妊娠11-12天鼠胚的上下颌突，胰酶消化；b.加入等量的含血清的培养液终止消化，吹打使组织分散成细胞悬液，离心，弃上清，加入培养液使细胞再悬浮后分装入培养瓶中，置孵箱中孵育；(3)外胚间充质干细胞的纯化：a.在原代培养时，单细胞悬液接种于培养瓶中培养至大部分细胞贴壁后，弃上清，加入新的培养液继续培养；b.细胞铺满瓶底时，消化传代，再通过交联有特异性抗体HNK-1(CD57)的磁珠分离纯化获得外胚间充质干细胞。