[发明专利]构建荧光假单胞菌诱变株M181的突变菌株M18ΔR的方法无效
| 申请号： | 03129544.4 | 申请日： | 2003-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN1472310A | 公开（公告）日： | 2004-02-04 |
| 发明（设计）人： | 许煜泉;王素莲;耿海峰 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/02;C12N15/31;C12Q1/68;//;C12R1:39) |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 | 代理人： | 王锡麟 |
| 地址： | 20003*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种构建荧光假单胞菌诱变株M181的突变菌株M18ΔR的方法，属于农业基因技术领域。具体步骤：(1)引物及聚合酶链PCR反应：根据E.coli，P.aeruginosa和E.carotovora中csrA基因的保守序列，设计PCR兼并引物用于扩增荧光假单胞菌M18基因组的csrA片段；(2)以该片段为探针，从M18的基因组柯斯文库中筛出阳性克隆；(3)运用同源重组剔除技术，构建M181菌株的csrA突变株M18ΔR采用固相滤膜杂交方法；(4)Plt的提取和定量测定：取菌悬液1ml，经等体积乙酸乙脂抽提，离心取上清，真空抽干，溶于与1ml甲醇中，取5μl进样。本发明具有实质性特点和显著的进步，M18ΔR在KB发酵液中积累Plt的量比出发菌株M181提高2倍以上。在PPM发酵液中，M18不能合成可检测的Plt量，M18ΔR仍能合成的大量Plt。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 荧光 假单胞菌 诱变 m181 突变 菌株 m18 方法 | ||
【主权项】：
1、一种构建荧光假单胞菌诱变株M181的突变菌株M18ΔR的方法，其特征在于，具体方法的步骤如下：(1)引物及聚合酶链PCR反应：根据E.coli，P.aeruginosa和E.carotovora中csrA基因的保守序列，设计PCR兼并引物用于扩增荧光假单胞菌M18基因组的csrA片段；(2)以该片段为探针，从M18的基因组柯斯文库中筛出阳性克隆；(3)运用同源重组剔除技术，构建M181菌株的csrA突变株M18ΔR采用固相滤膜杂交方法；(4)Plt的提取和定量测定：取菌悬液1ml，经等体积乙酸乙脂抽提，离心取上清，真空抽干，溶于与1ml甲醇中，取5μl进样。
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