[发明专利]一种应用同源重组法获得转基因柞蚕生产目的蛋白的方法

摘要

本发明属于生物工程领域。涉及一种利用同源重组序列组建转基因柞蚕基因表达载体生产外源基因产物的方法。特征是以柞蚕染色体上的线性DNA片段为同源重组序列组建柞蚕基因转移表达载体，将外源基因克隆到柞蚕基因转移表达载体上，重组质粒DNA经脂质体包埋后直接注射到柞蚕雌蛾的交配囊或雄蚕蛹的睾丸内，通过正常的发育，交配和孵化，获得含有外源基因的转基因柞蚕。经鉴定、品种选育和放养，就可利用柞蚕幼虫或蛹为宿主在体内大量生产外源基因产物。该方法利用柞蚕幼虫或蛹为活体宿主具有资源丰富稳定，外源基因表达量高，表达产物易于纯化等特点。

主权项

1、一种应用同源重组法获得转基因柞蚕生产目的蛋白的方法，其特征在于以柞蚕染色体上的线性DNA片段，包括各种基因的5’端与3’端调控及部分结构基因为同源序列，经过同源重组后组建转基因柞蚕基因转移表达载体，以柞蚕幼虫活体或蛹为宿主，在柞蚕体内生产外源基因产物；其中所述的线性DNA片段为存在于柞蚕染色体上的核苷酸序列，包括各种已知或未知的基因，如柞蚕丝素蛋白基因、丝胶基因或其它非编码蛋白的DNA片段；其中所述的外源基因包括一些能够改变柞蚕丝性质的基因，如绿色荧光蛋白基因、蛛丝牵引丝蛋白基因或另有其它目的及用途的基因。