[发明专利]神经营养因子的生产方法无效
| 申请号： | 02136033.2 | 申请日： | 2002-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN1151173C | 公开（公告）日： | 2004-05-26 |
| 发明（设计）人： | 黄岩山;王昌梅;裘霁宛;李辉;孙瑛;邹晔;孙汉栋;丁海 | 申请（专利权）人： | 杭州九源基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K14/48;C12P21/02;C12N15/12 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310018浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种神经营养因子的生产方法。它通过计算机辅助设计，对人睫状神经营养因子的基因进行修饰改造，获得改造后突变人睫状神经营养因子基因的cDNA，人工合成该cDNA，构建重组质粒，转化大肠杆菌，经全自动发酵罐高密度表达；以切向流超滤方式进行复性；以离子交换层析、疏水层析和分子筛层析顺序组合纯化，生产得到高纯度的睫状神经营养因子。本发明的优点：1)采用计算机辅助设计，对天然密码子进行了优化，实现了突变体在大肠杆菌中的稳定高表达。2)采用切向流超滤方式复性，可减少超滤过程中的极化现象。3)离子交换层析、疏水层析和分子筛层析三种不同分离机理层析顺序组合，使复性后的CNTF得以纯化精制，其纯度均大于95％。 | ||
| 搜索关键词： | 神经 营养 因子 生产 方法 | ||
【主权项】：
1.一种神经营养因子的生产方法，其特征在于通过计算机辅助设计，对人睫状神经营养因子的基因进行修饰改造，获得如图1所示的改造后突变人睫状神经营养因子基因的cDNA，人工合成该cDNA，构建重组质粒，转化大肠杆菌，经全自动发酵罐高密度表达；以切向流超滤方式进行复性；以离子交换层析、疏水层析和分子筛层析顺序组合纯化，生产得到高纯度的睫状神经营养因子。
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