[发明专利]用新鲜动物血提取超氧化物岐化酶的方法

摘要

用新鲜动物血提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于：抗凝剂为柠檬酸三钠的水溶液，洗涤液为氯化钠的水溶液，缓冲液为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的水溶液，氯仿作溶剂、乙醇起洗涤作用、丙酮起沉淀作用，用鸡、鸭血作原料，或用牛、羊、猪血作原料，工艺过程为：血液抗凝处理、分离血球、血球洗涤、收集红血球、热变过程、静化反应、成品收集；采用离心机和搅拌机进行。SOD可用于化妆品和食用保健品。

主权项

1、用新鲜动物血提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于：A：有机溶剂的配制：抗凝剂的配制方法，水与柠檬酸三钠的重量比为100∶(3.4～4.2)，经充分搅拌至完全溶解即可，洗涤液的配制方法，水与氯化钠的重量比为100∶(0.8～1)，经充分搅拌至完全溶解即可，缓冲液的配制方法，水重量∶磷酸氢二钠重量∶磷酸二氢钠重量＝100∶(1.35～1.65)∶(0.18～0.22)，经充分搅拌至完全溶解即可；B、操作步骤：(1)血液抗凝处理，按每50毫升血液加入6.40～7.84毫升抗凝剂，经充分搅拌均匀；(2)分离血球方法：将经抗凝处理后的血液分别按离心管容量装均匀，然后放入离心机内，按每分钟3000～5000转速离心4.5～5.5分钟后，切断离心机电源，将离心管取出，倒掉上层黄色液体后，再将离心管内下层的红色血球收集到一个烧杯内即可；(3)血球的洗涤方法：在装有红血球的烧杯内加入红血球两倍量的洗涤液，搅拌均匀后，分别装入离心管放入离心机内，按每分钟3000～5000转速离心2.7～3.3分钟，切断电源，取出离心管，倒掉上层液体，将洗涤后的血球收集到一个烧杯内，再加入血球量等量的去离子水，或纯净水或蒸馏水，剧烈搅拌4.5～5.5分钟后，一边搅拌一边加入烧杯内溶液量13～17％的氯仿与23～27％的乙醇，继续搅拌4.5～5.5分钟后，再将其溶液分别装入离心管放入离心机内，按每分钟3000～5000转速进行离心2.7～3.3分钟后，将上层液体倒入漏斗内进行过滤到一个烧杯内，离心管内下层沉淀物不要；(4)收集洗涤后红血球的方法在装有清液的烧杯内加入清液等量的冷丙酮，搅拌均匀，即有大量白色沉淀物产生，静置4.5～5.5分钟，便将其分别装入锥形管放入离心机内，按每分钟3000～5000转速进行离心2.7～3.3分钟，倒掉上层清液，下层沉淀即为血球；(5)热变办法：加入沉淀物量45～55倍的缓冲液，经搅拌充分后，用水浴法加热到55--65℃，鸡、鸭血；或55--60℃，牛、羊、猪血，然后迅速冷却至室温，再将溶液分别装入锥形管放入离心机内，按每分钟3000～5000转速离心2.7～3.3分钟后，将锥形管内的上层清液倒入漏斗过滤，去掉锥形管内下层沉淀；(6)静化反应的办法：在上层清液中加入等量体积的丙酮，充分搅拌均匀，静置10--20分钟，便形成白色结晶物，即为SOD成品水溶液；(7)将含有SOD成品的水溶液倒入漏斗过滤，滤纸上的白色晶体物便为SOD产品，冷却脱水，即得成品；(8)在低温状态下保存SOD；上述搅拌在搅拌机内进行，离心在离心机内进行。