[发明专利]炭疽保护抗原的高水平组成性生产

摘要

本发明涉及使用补料分批培养在大肠杆菌中制备炭疽保护抗原蛋白的方法。该方法建立了在大肠杆菌中快速、有效、有成本效益和高水平生产炭疽保护抗原(PA)的组成型表达系统。该方法的步骤涉及用含PA基因的重组组成型表达质粒转化大肠杆菌DH 5α细胞以获得重组DH 5α细胞和通过裂解所述细胞、接着变性凝胶电泳及使用PA抗体的蛋白质印迹技术来测试PA的表达。接着发酵并收集高细胞密度的细胞。所述的细胞用6－8摩尔尿素溶解并离心分离。尿素变性的PA从上述上清液中分离、纯化并此后洗脱。

主权项

1.使用补料分批培养在大肠杆菌中制备炭疽保护抗原的方法包括：-用含PA基因的重组组成型表达质粒转化大肠杆菌DH5α细胞以产生表达PA蛋白的重组DH5α细胞，-培养所述重组DH5α细胞并通过裂解所述细胞、变性凝胶电泳及使用PA抗体的蛋白质印迹技术来测试PA的表达。-在生物反应器中使用下列步骤发酵所述细胞：●多羟基化合物、碳水化合物或有机酸作为主要补充物在32-42℃加入Luria Broth培养基，●补料分批培养技术，和●用pH-DO静态方法检测营养丧失以产生表达PA蛋白的高细胞密度培养物，-以5000-10,000rpm对上述高密度细胞培养物离心10分钟收集所述细胞，-使用6-8摩尔尿素溶溶解所述高密度细胞培养物液，并在环境温度搅拌1-2小时，-在32-42℃以10,000-15,000rpm离心分离所述高密度细胞培养物碎片，30-60分钟，并收集含尿素变性PA的上清液，-从所述上清液中分离所述的尿素变性PA，用Ni-NTA色谱法提纯所述的PA并通过逐步除去尿素而所述的PA结合在柔和柱上，以及-洗脱所述提纯的变性PA，并在-20到-70℃冷冻等分部分储存保护抗体(PA)蛋白，温度取决于即时使用还是长期使用。