[发明专利]从螺旋藻中提取含铁超氧化物歧化酶的方法

摘要

本发明公开了一种从螺旋藻中提取含铁氧化物歧化酶的方法，藻体经超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、DEAE-23柱层析和SephadexG-75凝胶过滤提取含铁超氧化物歧化酶，具有工艺简便，Fe-DOS纯化到均一程度，并具有较高的比活。Fe-SOD应用于医药、化妆品、保健品和食品等许多领域。

主权项

1、一种从螺旋藻中提取含铁超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：(1)取鲜螺旋藻沥水后，悬浮于抽提缓冲液中，鲜藻重量与抽提缓冲液体积比为1∶2～5，冰浴下用2～5KW、10～30KHZ超声波超2～6min2次、间歇4～6min破碎细胞，抽提液在离心力8000～12000g离心30～60min，取上清液，得粗提液；(2)根据粗提液的体积，按30～70％饱和度计算(NH4)2SO4用量，将(NH4)2SO4缓慢加入粗提液中，充分搅拌，静置过夜，将沉淀液在8000～12000g离心40～80min，取上清液，用(NH4)2SO4将上清液调至75～90％饱和度；(3)沉淀液在3～8mM，PH值为7.5～8.0的磷酸缓冲液中透析12～30h后，上样到预先用3～8mM，PH值为7.5～8.0的磷酸缓冲液平衡好的DEAE-23柱上，上样速度为15～45ml/h，用磷酸缓冲液进行线性梯度洗脱，收集洗脱峰区酶液；(4)将收集液用PEG20000浓缩，以10～30ml/h的速度上样到预先用3～8mM，PH值为7.5～8.0的磷酸缓冲液平衡好的SephadexG-75柱上，并用磷酸缓冲液进行线性梯度洗脱，收集洗脱峰区酶液，以上操作在4～10℃进行。