[发明专利]截短型人胰岛素样生长因子－Ⅰ双基因拷贝工程菌株及其构建方法无效
| 申请号： | 00123610.5 | 申请日： | 2000-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN1281893A | 公开（公告）日： | 2001-01-31 |
| 发明（设计）人： | 刘晓辉;俞汝龙 | 申请（专利权）人： | 北京东方龙基生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/12;//;C12R119) |
| 代理公司： | 三高专利事务所 | 代理人： | 吴凤英 |
| 地址： | 北京市海淀区学院路3*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种截短型人胰岛素生长因子－I双基因拷贝工程菌株及其构建方法,用三条寡核苷酸引物,两次PCR扩增技术,扩增两个截短型人胰岛素样生长因子－I(tIGF－I)基因,按串联方法使两个rIGF－I基因首尾相接插入到质粒截体pExSecl中,构建出表达载体pExSecl/2(tIGF－I),即含双拷贝tIGF－I双基因拷贝的基因工程菌株E.coliBL21(DC3)/pExSec1/2(tIGF－I),表达产量比单拷贝基因质粒明显增加,达菌体蛋白的19－22%。 | ||
| 搜索关键词： | 截短型人 胰岛素 生长因子 基因 拷贝 工程 菌株 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
1、一种截短型人胰岛素样生长因子-Ⅰ双基因拷贝工程菌株，其特征在于，选用德国明斯特大学构建的融合体表达载体pExSec1，该载体含M3复制原点，T7启动调节序列，卡那霉素抗性基因，多克隆位点，和蛋白A的信号序列S和ZZ序列位点，在用限制性内切酶切除了SZZ序列后，在此位置接入两个首尾串联的双拷贝截短型人胰岛素样生长因子-I基因，得到非融合表达载体pExSecI转化大肠杆菌中，PExSecI其结构如下：
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