[发明专利]高纯度高活性藻蓝蛋白的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种从钝顶螺旋藻中分离纯化活性藻蓝蛋白的方法,其工艺流程是藻泥→提取→盐析→透析→浓缩→sephadexG200→DEAE→SephadexG25→SephadexG200→冷冻干燥。本发明简化了分离纯化程序,易于操作,所获藻蓝蛋白的纯度和活性高,且成本低,可作为一种荧光标记物用于免疫化学分析,可以做到双色或三色标记,具有临床应用前景,如癌细胞的早期诊断。

主权项

1、一种高纯度高活性藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于：(1)新鲜的钝顶螺旋藻藻泥，加入0．001～0．005M，PH=7的磷酸缓冲液，冻融1～2次后，置于冰浴中超声破碎细胞；(2)在4～10℃，以9000～11000转／秒离心50～70分钟，弃沉淀；(3)取上清，加入30～60％饱和度硫酸铵在4～10℃，避光静置过夜，在4～10℃，以13000～18000转／秒离心20～40分钟，取沉淀；(4)用0．01～0．03M，PH=7的磷酸缓冲液溶解沉淀，在4～10℃，避光静置，以0．01～0．03M，PH=7磷酸缓冲液透析，分子截留量12000Da；(5)经快速浓缩后，上SephadexG200层析柱，用0．01～0．03M，PH=7磷酸缓冲液洗脱，收集峰值组分，上DEAE-SephadexA25柱，用0．005～0．007M，PH=7的磷酸缓冲液和0．2～0．4M，PH=7的氯化钠洗脱，收集峰值组分，上ScphadcxG200柱，用0．01～0．03M，PH=7的磷酸缓冲液洗脱，整个柱层析在8～10℃，避光条件下进行；(6)藻蓝蛋白立即冰冻干燥，所得干粉在4～10℃，避光保存。