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[发明专利]用于VA RNA转录的核酸构建体-CN202180069666.0在审
发明人： S·奥斯兰德;U·格普费特 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2021-10-13 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本文报道一种新颖腺病毒VA RNA核酸，其中已经移除野生型2型聚合酶III启动子，并且已经加入U6‑snRNA启动子或可诱导启动子。
用于 va rna 转录核酸构建

[发明专利]具有基因敲除的哺乳动物细胞系-CN202180065221.5在审
发明人： S·奥斯兰德;N·鲍尔;B·奥斯瓦尔德 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2021-09-23 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本文报道了一种用于产生表达异源多肽的重组哺乳动物细胞的方法以及一种用于使用所述重组哺乳动物细胞生产异源多肽的方法，其中在所述重组细胞中，至少内源基因MYC的表达已被降低。已经发现，哺乳动物细胞例如CHO细胞中的至少内源基因MYC的敲除使借由所述细胞的重组生产率提高。
具有基因哺乳动物细胞系

[发明专利]用于同时基因活化的核酸构建体-CN202180069016.6在审
发明人： S·奥斯兰德;U·格普费特 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2021-10-13 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N15/64 文献下载
摘要：本文报道了新DNA构建体及其使用方法。本发明在DNA分子的编码链和模板链上使用非生产性/无活性启动子和基因的特意排列，通过与位点特异性重组酶的相互作用，所述启动子和基因被转变成其活性形式。更详细地，根据本发明所述的DNA元件对于所含有的第一基因和第二基因的表达不具有功能。通过对于所述第一基因和第二基因的表达不具有功能，根据本发明所述的DNA元件可以整合到细胞的基因组中，而没有所包含的结构基因在整合之后已经直接表达的风险。仅当识别所述DNA元件的重组识别序列并对其具有功能的重组酶被活化或导入所述细胞中时，所述基因才表达。由此，在本发明的经基因整合的DNA元件中，介于第一突变重组酶识别序列与第二突变重组酶识别序列之间的重组酶介导的盒反转(RMCI)被启动。所述RMCI引起位于两个突变重组酶识别序列之间的根据本发明所述的DNA元件的部分的反转。由此第一启动子变成可操作地连接至所述第一基因，并且第二启动子变成可操作地连接至所述第二基因。仅在此之后，所述第一基因和所述第二基因才被转录，并且各自编码的蛋白质被表达。因此，根据本发明所述的DNA元件特别地用于同时活化细胞内的两个基因。
用于同时基因活化核酸构建

[发明专利]用于从短片段组装大核酸的方法-CN202180008170.2在审
发明人： J·奥尔;S·奥斯兰德;P·M·许尔斯曼 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2021-01-08 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本文报道了一种用于克隆多基因质粒的模块化且有效的方法，所述方法仅包含单个克隆步骤且无需使用初步的单基因载体。在第一步骤中，PCR产生的携带不同抗体链的基因的DNA块与相应的衔接子连接，所述衔接子用作不同的DNA块的连接物。在第二步骤中，第一步骤的PCR产生的片段经由位于每个骨架、DNA块和衔接子片段的一端的独特重组位点以正确的排列方式而组装。这种新策略产生了一种模块化且有效的方法，所述方法允许将表达盒直接克隆到相应的骨架中且无需中间克隆步骤，并使得能够快速克隆不同抗体形式的可变基因构型。根据本发明的这种新的克隆方法在时间、劳动力和成本方面提供了相当大的优势。
用于片段组装核酸方法

[发明专利]通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生多价多特异性抗体表达细胞的方法-CN202080057659.4在审
发明人： J·奥尔;S·奥斯兰德;M·波普;U·格普费特;H·哈贝克-杨森;C-L·霍克 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2020-06-17 - 公布日： 2022-03-29 - 主分类号： C07K16/46 文献下载
摘要：本文尤其报道了一种产生三价双特异性抗体的方法，所述方法包括以下步骤：培养包含编码所述三价双特异性抗体的脱氧核糖核酸的哺乳动物细胞，并从细胞或培养基中回收所述三价双特异性抗体，其中编码所述三价双特异性抗体的所述脱氧核糖核酸稳定地整合到所述哺乳动物细胞的基因组中并且在5'至3'方向上包含编码第一重链的第一表达盒、编码第一重链的第二表达盒、编码第一轻链的第三表达盒、编码第一轻链的第四表达盒、编码第二重链的第五表达盒、编码第一轻链或第二重链或第二轻链的第六表达盒和编码第二轻链的第七表达盒，其中所述第一重链从N末端至C末端包含第一重链可变结构域、CH1结构域、铰链区、CH2结构域、CH3结构域、肽接头、第二重链可变结构域和CL结构域，所述第二重链从N末端至C末端包含第一重链可变结构域、CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域，所述第一轻链从N末端至C末端包含第一轻链可变结构域和CH1结构域，且所述第二轻链从N末端至C末端包含第二轻链可变结构域和CL结构域，其中所述第二重链可变结构域和所述第一轻链可变结构域形成第一结合位点，且所述第一重链可变结构域和所述第二轻链可变结构域形成第二结合位点。
通过限定组织形式靶向整合表达产生多价多特异性抗体细胞方法

[发明专利]通过使用Cre mRNA进行的靶向整合来产生蛋白质表达细胞的方法-CN202080044531.4在审
发明人： S·奥斯兰德 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2020-06-17 - 公布日： 2022-02-22 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本文报告了一种用于产生包含编码多肽的脱氧核糖核酸并且分泌所述多肽的重组哺乳动物细胞的方法，该方法包括以下步骤a)提供包含外源核苷酸序列的哺乳动物细胞，所述外源核苷酸序列整合在所述哺乳动物细胞的基因组的基因座内的单个位点处，其中所述外源核苷酸序列包括侧接至少一个第一选择标志物的第一重组识别序列和第二重组识别序列，以及位于所述第一重组识别序列与所述第二重组识别序列之间的第三重组识别序列，并且所有重组识别序列都不同；b)向a)中所提供的细胞中引入两种脱氧核糖核酸的组合物，所述两种脱氧核糖核酸包含三种不同的重组识别序列以及一至八个表达盒，其中第一脱氧核糖核酸在5’至3’方向上包含第一重组识别序列、一个或多个表达盒、编码一个第二选择标志物的表达盒的5’末端部分以及第三重组识别序列的第一拷贝，并且第二脱氧核糖核酸在5’至3’方向上包含所述第三重组识别序列的第二拷贝、编码所述一个第二选择标志物的表达盒的3’末端部分、一个或多个表达盒以及第二重组识别序列，其中所述第一脱氧核糖核酸和所述第二脱氧核糖核酸的第一重组识别序列至第三重组识别序列与整合的外源核苷酸序列上的第一重组识别序列至第三重组识别序列匹配，其中编码所述一个第二选择标志物的所述表达盒的所述5’末端部分和所述3’末端部分在合在一起时形成所述一个第二选择标志物的功能性表达盒；c)引入Cre重组酶mRNA，以及d)选择表达所述第二选择标志物并且分泌所述多肽的细胞，从而产生包含编码所述多肽的脱氧核糖核酸并且分泌所述多肽的重组哺乳动物细胞，其中所述Cre重组酶mRNA是所述方法中Cre重组酶的唯一来源。
通过使用 cre mrna 进行靶向整合产生蛋白质表达细胞方法

[发明专利]具有SIRT-1基因敲除的哺乳动物细胞系-CN202080046545.X在审
发明人： S·奥斯兰德;B·奥斯瓦尔德 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2020-06-24 - 公布日： 2022-02-08 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本文报道了一种用于产生表达异源多肽的重组哺乳动物细胞的方法以及一种用于使用所述重组哺乳动物细胞产生异源多肽的方法，其中在所述重组细胞中，内源性SIRT‑1基因的表达已被降低。已经发现，哺乳动物细胞例如CHO细胞中的去乙酰化酶‑1基因(SIRT‑1)的敲除使重组生产率提高，并且减少所述细胞产生的乳酸。此外，已经发现，补料分批发酵结束时活力下降有所减少。
具有 sirt 基因哺乳动物细胞系

[发明专利]通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生二价双特异性抗体表达细胞的方法-CN202080044539.0在审
发明人： J·奥尔;S·奥斯兰德;M·波普;U·格普费特;C-L·霍克 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2020-06-17 - 公布日： 2022-02-01 - 主分类号： C07K16/46 文献下载
摘要：本文报道了一种用于产生二价双特异性抗体的方法，所述方法包括以下步骤：培养包含编码所述二价双特异性抗体的脱氧核糖核酸的哺乳动物细胞，以及从所述细胞或培养基中回收所述二价双特异性抗体，其中编码所述二价双特异性抗体的所述脱氧核糖核酸稳定地整合到所述哺乳动物细胞的基因组中并且在5’至3’方向上包含编码第一轻链的第一表达盒、编码第一重链的第二表达盒、编码第二轻链的第三表达盒以及编码第二重链的第四表达盒，或者包含编码第一轻链的第一表达盒、编码第二重链的第二表达盒、编码第二轻链的第三表达盒以及编码第一重链的第四表达盒，其中所述第一重链从N末端到C末端包含第一重链可变结构域、CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域，所述第二重链从N末端到C末端包含第一轻链可变结构域、CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域，所述第一轻链从N末端到C末端包含第二重链可变结构域和CL结构域，并且所述第二轻链从N末端到C末端包含第二轻链可变结构域和CL结构域，其中所述第一重链可变结构域和所述第二轻链可变结构域形成第一结合位点，并且所述第二重链可变结构域和所述第一轻链可变结构域形成第二结合位点。
通过限定组织形式靶向整合表达产生二价特异性抗体细胞方法

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