本发明属于生物病原体检测技术领域,具体涉及一种MDV TaqMan荧光定量PCR检测方法及组合物。该组合物组合物含有用于检测马立克病病毒的引物和探针,具体包括,核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1‑3所示的上游引物、下游引物和探针。该检测方法为:提取待测样本的DNA,以所述DNA为模板,采用序列如SEQ ID NO:1‑3所示的引物和探针进行PCR扩增,根据测得的Ct值对待测样本进行定性和/或定量检测。本发明基于MDV序列保守区设计特异性引物,在通过构建标准品质粒,绘制标准曲线,建立操作简易、敏感性高、重复性好、特异性强的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,可以实现MDV的有效检测。