本发明公开一种抗肿瘤蛋白质药物的质量稳定工艺,所述质量稳定工艺包括以下步骤:(1)目标蛋白质的大肠杆菌表达与发酵制备;(2)大肠杆菌工程菌的破碎与包涵体的回收;(3)包涵体洗涤与目标蛋白质的回收;(4)目标蛋白质强阳离子柱sepharose Fast Flow层析纯化;(5)弱阴离子柱DEAE琼脂糖凝胶层析纯化与回收目标蛋白质;(6)目标蛋白质的稳定保存;(7)制备目标蛋白质冻干粉针剂与冻干工艺;所述目标蛋白质是指一类TAT及其突变体携载的抗肿瘤活性survivin突变体蛋白质。本发明同时兼顾产量、生物活性和稳定性三方面,很好地解决了一类抗肿瘤蛋白质药物的质量稳定的全程控制工艺。