本发明公开了一种β‑甘露聚糖酶突变体N304/E332‑C及其制备和应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供的突变体N304/E332‑C的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其是由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的野生型β‑甘露聚糖酶突变所得。本发明提供的突变体在70℃下的半衰期相比野生型提高了2.40倍，野生型的β‑甘露聚糖酶在pH为10～12的缓冲液中耐受1h后的相对酶活仅保留在22％～74％之间，而该突变体在相同条件下能保留45％～87％的相对活性，和野生型相比，该突变体的稳定性显著提高。本发明提供的突变体在养殖业和工业生产中具有良好的应用前景。
本发明公开一种来源于昆虫纲赤拟谷盗抗菌肽HL1，包括抗菌肽HL1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，抗菌肽HL1的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；抗菌肽构建方法包括步骤一、设计抗菌肽扩增引物HL1F和HL1R，步骤二、重组表达质粒pPIC9K‑HL1的构建，步骤三、重组菌株GS115的诱导表达，步骤四、诱导表达得到高表达稳定性的抗菌肽HL1；本发明通过宏基因组学技术获得赤拟谷盗基因组，并通过保守序列分析得到抗菌肽HL1及其核苷酸序列，通过基因工程实现抗菌肽HL1在毕赤酵母GS115中的表达，得到的重组表达抗菌肽HL1依然保持抗菌活性，且对革兰氏阳性和阴性菌均有抑菌活性，抗菌谱得到扩展。
本发明公开了一种β‑半乳糖苷酶GalNC3‑89及其制备方法和应用，该β‑半乳糖苷酶GalNC3‑89氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，共827个氨基酸，理论分子量为91.50kDa，编码基因如SEQ ID NO.2所示。所述β‑半乳糖苷酶GalNC3‑89好的耐盐特性、温度稳定性及pH稳定性，高效转糖基活性和高效水解乳糖活性，在食品加工、生产生物乙醇和制备工业乳制品中具有较好的应用潜力。
本发明公开了一种来源于比目鱼肠道的抗菌肽SpCru5及其制备方法和用途，该抗菌肽SpCru5的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过宏基因组学技术获得一株比目鱼肠道的基因组，并通过保守序列分析得到抗菌肽SpCru5及其核苷酸序列，通过基因工程技术首次实现该抗菌肽SpCru5在毕赤酵母X33中的表达，重组表达的抗菌肽SpCru5依然保持抗菌活性，并且抗菌谱广，对革兰氏阳性和阴性菌均有抑菌活性。
本发明公开了一种新型单宁酶及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供的单宁酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该单宁酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的新型单宁酶与现有的单宁酶相比，其pH稳定性和温度稳定性更好，其对苜蓿草和构树饲料进行降解处理1h时，其中的单宁降解率分别达到31.26％和28.56％，在单宁的降解中具有显著的应用价值。
本发明公开了一种低温活性改良的外切菊粉酶突变体MutDR121EH9，该突变体MutDR121EH9具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，其热活性和热稳定性发生了改变，在低温下具有更高的活性，而热稳定性降低，低温活性变高有利于在低温反应时减少酶的用量或缩短反应时间，热稳定性变差有利于通过热处理控制酶的反应过程。野生酶InuAMN8的最适温度为35℃，突变酶MutDR121EH9的最适温度为20℃；50℃处理后，野生酶InuAMN8保持81％以上的酶活性，突变酶MutDR121EH9的酶活从32％降至14％。本发明的突变体MutDR121EH9可应用于食品、酿酒和洗涤等行业。
本发明公开了一种β‑甘露聚糖酶突变体H146/T149‑C及其制备和应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供的β‑甘露聚糖酶突变体H146/T149‑C的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其是由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的野生型β‑甘露聚糖酶突变所得。本发明提供的突变体在70℃下的半衰期相比野生型提高了1.79倍，其热稳定性显著提高，同时野生型的β‑甘露聚糖酶在强碱性溶液(pH10～12)中耐受1h后相对活性仅保留在22％～74％之间，而该突变体在相同条件下则保留44％‑85％的相对活性，和野生型酶相比其耐碱性能显著提升。本发明提供的突变体在养殖业和工业生产中具有良好的应用前景。
本发明公开了N‑乙酰氨基葡萄糖苷酶突变体、重组表达载体及菌和应用，属于基因工程技术领域，所述的N‑乙酰氨基葡萄糖苷酶突变体MutNΔ4的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。通过上述方式，本发明提供了一种催化效率提高的N‑乙酰氨基葡萄糖苷酶突变体，该突变体命名为MutNΔ4；本发明利用基因工程技术，删除野生酶JB10NagA‑opt的N端氨基酸序列“ELAL”，获得了突变体MutNΔ4，其最适温度为50℃，最适pH为7.0，其催化效率为874.6s‑1mM‑1，相比野生N‑乙酰氨基葡萄糖苷酶(野生酶JB10NagA‑opt)催化效率提高了4倍，为其在医学或功能性食品生产提供了有效保障。
本发明公开了一种热不稳定的β‑木糖苷酶突变体E179GD182G及其应用，涉及基因工程技术领域，该突变体E179GD182G的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的突变体E179GD182G最适pH为4.5，最适温度为50℃，与氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的重组野生β‑木糖苷酶JB13GH39P28相比，突变体E179GD182G热性质发生变化，其在60℃活性更低且快速失活，有利于酶的安全使用和应用于低温环境要求下的生物技术领域。
本发明公开了一种热耐受性降低的β‑木糖苷酶突变体K130GK137G及其应用，涉及基因工程技术领域，该突变体K130GK137G的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。本发明提供的突变体K130GK137G最适pH为4.5，最适温度为50℃，与氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的重组野生β‑木糖苷酶JB13GH39P28相比，该突变体K130GK137G的热性质发生了改变，其在50℃的稳定性下降，在60℃的活性变低且失活更迅速，有利于酶的安全使用，且在低温生物技术领域有较高的应用价值。
