本发明公开了一种PCR‑LF技术检测碳青霉烯类耐药基因KPC和NDM的引物组合物及其应用。所述引物组合物包含:用于检测KPC基因的上游引物如SEQ ID No.1所示,下游引物序列如SEQ ID No.2;用于检测NDM基因的上游引物如SEQ ID No.3所示,下游引物序列如SEQ ID No.4;其中KPC基因的上游引物5’端标记生物素,下游引物3’端标记地高辛;NDM基因的上游引物5’端标记生物素,下游引物3’端标记FAM。本发明系首次采用多重PCR结合胶体金免疫侧流层析技术的方法实现KPC和NDM碳青霉烯类耐药基因的检测,耗时短、灵敏度高、特异性强。