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[发明专利]一种油松年龄标记基因PtMADS26的筛选鉴定方法与应用-CN202211367270.7在审
发明人：林金星;张莹莹;张曦;沈微微;胡子建;洪岩铭;杨舜垚;许会敏;钮世辉;沈应柏 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2022-11-02 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： C12Q1/6809 文献下载
摘要：本发明公开了一种油松年龄标记基因PtMADS26的筛选鉴定方法与应用，涉及林木育种技术领域。本发明基于加权共表达网络分析筛选和鉴定到油松年龄标记基因PtMADS26，进一步通过实时荧光定量分析实验检测PtMADS26在不同年龄油松中的表达模式，并测定其在反复截顶和未截顶油松中的表达水平，从而确定其参与油松成熟态向幼年态的调控。本发明通过共表达网络分析为挖掘树木年龄标记基因及互作关系预测提供了新的思路，在克服多年生树木成熟效应，促进无性繁殖，缩短育种年限方面具有重要意义。
一种油松年龄标记基因 ptmads26 筛选鉴定方法应用

[发明专利]一种挖掘油松年龄相关基因的方法-CN202211547264.X在审
发明人：林金星;洪岩铭;张莹莹;沈诗雅;张曦;钮世辉;沈应柏;崔亚宁 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2022-12-05 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： G16B50/30 文献下载
摘要：本发明提供了一种挖掘油松年龄相关基因的方法，属于基因工程技术领域，包括：构建不同年龄的油松茎段的转录组数据集，获得原始数据；分析差异表达基因；利用差异表达基因确定皮尔逊相关系数的分界值，通过PCC的分界值构建多个基因表达网络；对基因表达网络中的TF表达量进行单调性测绘，以确定种子基因；将种子基因进行BFS算法运算，获得多个时序层级基因表达网络模型；根据获得的时序层级基因表达网络模型中出现的核心连接点基因，作为油松年龄相关基因。本发明成功挖掘出与年龄性状密切相关的基因DAL35，为分析油松老化分子机制奠定了基础，也为改善油松老化现象提供了遗传资源和技术支持。
一种挖掘油松年龄相关基因方法

[发明专利]一种制备油松针叶原生质体的方法-CN201910743114.8有效
发明人： 钮世辉;余峰;彭莉;马晓涵;郑嘉靖;韩方旭 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2019-08-13 - 公布日： 2023-02-07 - 主分类号： C12N9/42 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备油松针叶原生质体的方法。本发明首先公开了用于制备油松针叶原生质体的组合物，包括纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶；所述组合物中，纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶的质量比为25∶4∶10。本发明进一步公开了包含上述组合物的酶解液和成套试剂及油松针叶原生质体的制备方法。本发明以油松幼嫩针叶作为材料，通过调节酶解体系和洗涤体系，建立油松原生质体制备体系。该体系制备得到的原生质体数量及活性都较好，为后期油松功能基因的亚细胞定位、蛋白质互作、下游靶基因筛选、单细胞测序、原生质体悬浮培养等研究提供了技术保障。
一种制备油松针叶原生质体方法

[发明专利]树木老化时空模式鉴定、平茬复幼及扦插规模化繁育方法-CN202111040874.6有效
发明人：林金星;杨舜垚;何其邹洪;张曦;王莉;李福明;林昌明;黄少伟;魏爱华;詹定举;狄贵明;李俊峰;马彦广;卢银喜;刘玄德;薛敦孟;贺国鑫;李世安;王浩;胡东阳;于洋;张咏;王丽娟;贾婉;陈惠敏;林文奖;陈亚斌;阮成江;吴世军;刘四黑;沈云;吴兵;张正;金飚;李卫星;王明先;陆金凯;徐源;钟磊;钟岁英;黄婷;邓乐平;张智霖;庞贞武;黄全东;孙雪阳;李悦;钮世辉;张莹莹;胡子建;沈微微;赵媛媛;张贵芳;胡海琳;徐黎;鄂一岚;许会敏 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2021-09-07 - 公布日： 2021-12-24 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明涉及树木老化时空模式鉴定、平茬复幼及扦插规模化繁育方法，包括对树木主干形成层和枝条中与老化和年龄相关基因的转录与翻译水平进行检测并建立树木老化模式，通过树木老化模式明确其具有强再生能力的幼化部位；对采穗母株进行定植，建立规模化的采穗圃；对采穗母株截顶促萌和重复修剪形成“矮桩平台式”株型，收获大量均匀、粗细适中的宜扦插复幼枝条；采用三元激素处理法对复幼枝条进行促根处理，诱导复幼枝条产生大量不定根，大幅提高树木复幼枝条扦插成活率和生根效率。本发明突破了树木扦插的多个技术瓶颈，具有繁育效率高、育苗流程化的特点，是目前最为直接且高效的树木规模化繁育方法。
树木老化时空模式鉴定平茬复幼扦插规模化繁育方法

[发明专利]一种樟子松针叶原生质体的制备方法及应用-CN201911139202.3有效
发明人：李伟;朱茜雅;韩方旭;钮世辉 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2019-11-20 - 公布日： 2021-11-23 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备樟子松针叶原生质体的方法，属于物细胞生物技术领域。所述方法包括（1）获得墇子松幼苗针叶，获得所述针叶叶条；（2）将所述叶条进行预处理；（3）将叶条放入酶解液中进行酶解；（4）将叶条从酶解液中取出，放入W5'溶液中，室温、避光、振荡，使得原生质体释放至所述W5'溶液中；（5）将包含原生质体的W5'溶液转移至100μm的尼龙网上进行过滤；（6）将包含原生质体的W5'溶液置于冰上30min，吸取上清液，加入预冷的W5'溶液中重悬原生质体。利用本发明，可获得较多数量并且状态良好、耐受性强的原生质体。
一种松针原生质体制备方法应用

[发明专利]一种油松愈伤组织瞬时表达基因功能鉴定方法-CN201910023159.8在审
发明人：李伟;钮世辉;刘双委;马晶晶 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2019-01-10 - 公布日： 2019-04-26 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种油松愈伤组织瞬时表达基因功能鉴定方法。本发明提供了一种制备油松愈伤组织的方法，包括如下步骤：以油松下胚轴为外植体，将所述外植体在诱导培养基中诱导培养，得到油松愈伤组织；所述诱导培养基含有1‑2mg/L2,4‑D和1‑1.5mg/L 6‑BA。本发明以油松实生幼苗的下胚轴为外植体，通过调节培养条件，建立油松愈伤组织诱导条件。该研究优化的油松愈伤组织瞬时转化体系有助于外源基因在油松愈伤组织内的表达，为后期通过转基因技术研究目标基因功能奠定了技术基础。
油松愈伤组织外植体基因功能鉴定诱导培养基瞬时表达愈伤组织诱导转基因技术基因功能技术基础培养条件实生幼苗外源基因研究目标诱导培养转化体系下胚轴胚轴制备优化研究

[发明专利]一种在油松下胚轴中进行基因瞬时表达的方法-CN201811496734.8在审
发明人：马晶晶;钮世辉;李悦;李伟;刘双委 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2018-12-07 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种在油松下胚轴中实现基因瞬时表达的方法，包括以下步骤：1)油松下胚轴的预处理；2)油松下胚轴组织预侵染的农杆菌菌液培养和处理；3)将下胚轴组织浸泡于导入了35S:Gus基因序列的农杆菌侵染溶液；4)超声波处理组织实现基因转入；5)下胚轴组织侵染后的继续培养。本发明建立的基因瞬时表达方法能够较高效地实现基因在油松下胚轴中表达，操作简单且结果可靠，可为油松基因功能验证和调控关系研究提供技术支持。
胚轴瞬时表达基因下胚轴组织侵染预处理基因功能验证超声波处理农杆菌菌液农杆菌侵染调控关系技术支持胚轴组织油松浸泡转入研究

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