本发明公开了一种快速鉴定酒类发酵污染微生物的引物组、试剂盒及检测方法。所述引物组包括用于扩增微生物基因序列的上游引物和下游引物,所述上游引物选自核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5中的至少一种;所述下游引物选自核苷酸序列如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10中的至少一种。利用本发明的引物组检测酒类发酵样本时,可在一次实验中进行所有检测,能用较少的引物检测所有酒类发酵中常见的污染微生物类型,缩短检测时间,准确性高。