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[发明专利]一种降低可复制性腺病毒的细胞株NHEK-C28的建立与应用-CN202210395109.4在审
发明人：王志民;卢双双;连雪琪;钟晶晶;杨晓燕;褚永超;黄磊 -专利权人：郑州大学
申请日： 2022-04-15 - 公布日： 2022-10-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种降低可复制性腺病毒的细胞株NHEK‑C28的建立与应用，包括以下步骤:步骤S1:针对E1A基因，设计sgRNA序列；步骤S2:构建PX459‑sgRNA载体；步骤S3:将PX459‑sgRNA1～6质粒分别转染到单克隆细胞JH293‑Cl one21中；步骤S4:验证各sgRNA的敲除效率；步骤S5:选PX459‑sgRNA 6质粒敲除的细胞进行单克隆的筛选；步骤S6:筛选出的单克隆细胞鉴定敲除效果，选择一株敲除效果好的单克隆；步骤S7:再次敲除筛选出的C14细胞；步骤S8:敲除细胞NHEK‑C28中E1A蛋白水平表达；步骤S9:敲除细胞NHEK‑C28功能验证；本发明，通过改造腺病毒的包装细胞系，增强病毒使用的安全性，从而不影响腺病毒产毒同时降低可复制型腺病毒的单克隆细胞株NHEK‑C28，并在GMP条件下建立三级细胞库，便于用于后续腺病毒的大规模生产应用。
一种降低复制性腺病毒细胞株 nhek c28 建立应用

[发明专利]人胚肾上皮细胞293T-Clone3单克隆细胞株及其应用-CN202010055160.1有效
发明人：王志民;连雪琪;钟晶晶;赵晓燕;褚涌超;卢双双;秦斌;张成林;王尧河 -专利权人：郑州大学
申请日： 2020-01-17 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体为一种人胚肾上皮细胞293T‑Clone3单克隆细胞株及其应用。本发明的单克隆细胞株细胞株保藏号为：CCTCC NO：C2019262，具有高的转染效率，转染效率高于商品化的AAV293，转染效率均达到90％以上，每个150mm皿包装的AAV的上清与细胞的总病毒基因拷贝数均在1011以上，最高可达1012，上清中的病毒基因拷贝数均在1011以上，而AAV293包装出来的病毒基因拷贝数在109‑1011。相较于AAV293，本发明的人胚肾上皮细胞293T‑Clone3单克隆细胞株更能满足实验需求。
人胚肾上皮细胞 293 clone3 单克隆细胞株及其应用

[发明专利]一种提高腺病毒产毒能力的单克隆细胞、细胞库及制备方法-CN202110236990.9在审
发明人：王志民;连雪琪;钟晶晶;赵晓燕;褚涌超;程振国;张向阳;秦斌;黄磊 -专利权人：郑州大学
申请日： 2021-03-03 - 公布日： 2021-07-30 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明适用于生物技术领域，提供了一种提高腺病毒产毒能力的单克隆细胞、细胞库及制备方法。所述的提高腺病毒产毒能力的单克隆细胞的制备方法，包括以下步骤：比较腺病毒在细胞JH293和293T中的产毒效率；从产毒效率高的JH293细胞中筛选多个单克隆细胞；验证各单克隆细胞分别对腺病毒11（Adenovirus 11,Ad11）和腺病毒5（Adenovirus 5,Ad5）的产毒能力，得到分别对Ad11和Ad5产毒能力较高的单克隆细胞。本发明改进现有腺病毒扩增所用细胞系，提高腺病毒生产效率，同时在GMP条件下建立了能够用于大规模腺病毒生产的三级细胞库。
一种提高病毒能力单克隆细胞制备方法

[发明专利]乳腺丝抑蛋白的新用途-CN201810140459.X在审
发明人：李晓华;连雪琪;汤思洁;江佳佳;程慧颖;郭佳倩 -专利权人：张家港澳洋医院有限公司
申请日： 2018-02-11 - 公布日： 2018-07-06 - 主分类号： A61K38/17 文献下载
摘要：本发明公开了乳腺丝抑蛋白的新用途，即乳腺丝抑蛋白（maspin）能结合到雄激素受体（AR）基因转录启动子区域，负向调节AR基因转录，抑制AR的表达，从而降低AR的水平和活性。因为AR的高表达及其介导的细胞信号通路的异常激活是前列腺肿瘤的发生、发展以及治疗预后不佳的主要原因。因此，可利用或基于此发明（利用maspin抑制AR表达的生物学功能），将maspin作为抗AR药物的协同分子，设计出抗肿瘤路径和开发基于该发明的预防性和治疗性药物；设计基于提高maspin表达的临床应用路径，协同和促进AR拮抗剂类药物的临床治疗药效。
乳腺蛋白新用途协同细胞信号通路启动子区域前列腺肿瘤生物学功能雄激素受体治疗性药物转录基因转录临床应用临床治疗高表达抗肿瘤预防性拮抗剂预后负向介导激活治疗开发

[发明专利]一种脂多糖诱导肿瘤细胞生成肿瘤干细胞的用途和方法-CN201711146080.1在审
发明人：李晓华;杨思洁;连雪琪;江佳佳 -专利权人：张家港澳洋医院有限公司
申请日： 2017-11-17 - 公布日： 2018-04-13 - 主分类号： C12N5/095 文献下载
摘要：本发明公开了一种脂多糖诱导肿瘤细胞生成肿瘤干细胞的用途和方法，解决了现有技术难以获取符合药物的药效研究要求、数量足够且数量可控的肿瘤干细胞的问题。本发明的方法包括(1)获取悬浮的单个肿瘤细胞，接种于培养皿中进行单层贴壁细胞培养，培养过程中加入脂多糖培养4～10h；(2)添加胰蛋白酶消化，然后洗涤获得脂多糖处理后的单个肿瘤细胞；(3)将脂多糖处理后的单个肿瘤细胞与干细胞培养液混合获得细胞悬液；(4)细胞悬液经悬浮培养后获得肿瘤干细胞。本发明能够获得符合药物的药效研究要求的肿瘤干细胞，且诱导生成的肿瘤干细胞具有数量显著增加、数量可控等优点。
一种多糖诱导肿瘤细胞生成干细胞用途方法