本发明属于分子技术领域,具体涉及一种检测大鲵分布的环境DNA方法。具体技术方案为:一种检测大鲵分布的环境DNA方法,使用至少一对引物对待测样品进行PCR扩增检测,电泳结果中出现158~224bp的阳性条带,则认为待测样品来源的环境中分布有大鲵,所述引物对为Ad_Cytb_E1,序列为:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2。本发明利用残留水体中的中国大鲵粪便、皮肤脱落物及尸体等环境DNA,结合分子生物学技术,开发出具有高特异性、高灵敏度和通用性强的引物,建立了一种可针对大鲵属不同物种的分布进行快速、标准化检测的方法。