本发明公开了用于构建ATM基因突变的共济失调‑毛细血管扩张症模型猪核移植供体细胞的试剂盒。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示ATM‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示ATM‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法：将ATM‑gRNA1、ATM‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为ATM基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备共济失调‑毛细血管扩张症模型猪；制备共济失调‑毛细血管扩张症细胞模型或共济失调‑毛细血管扩张症组织模型或共济失调‑毛细血管扩张症器官模型。本发明对于共济失调‑毛细血管扩张症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了用于构建TPH2基因突变的抑郁症克隆猪核供体细胞的CRISPR/Cas9系统。该系统包含Cas9表达载体和针对猪TPH2基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.2所示，所述的gRNA表达载体表达SEQ ID NO.33所示的gRNA；且该表达载体的载体骨架为pKG‑U6gRNA，质粒全序列如SEQ ID NO.3所示。采用本发明筛选的gRNA联合改造的Cas9高效表达载体进行基因编辑,编辑效率比原载体有了显著的提高。
本发明公开了一种用于构建先天性黑蒙症克隆猪核供体细胞的CRISPR/Cas9系统及其应用。猪RPE65基因的gRNA，序列如SEQ ID NO.23所示。一种用于猪RPE65基因编辑的CRISPR/Cas9系统，包含本发明所述的gRNA表达载体和Cas9表达载体。所述的Cas9表达载体为pU6gRNA eEF1a‑mNLS‑hSpCas9‑EGFP‑PURO。采用本发明筛选的gRNA联合改造的Cas9高效表达载体进行基因编辑,编辑效率比原载体提高100％以上。本发明为先天性黑蒙症猪模型的制备奠定了坚实的基础，对于针对该病的治疗及病理研究具有重大应用价值。
本发明公开了用于ADCY3基因编辑的CRISPR系统及其在构建肥胖症猪核移植供体细胞中应用。一种用于猪ADCY3基因编辑的CRISPR/Cas9系统，包含Cas9表达载体和针对猪ADCY3基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.2所示，所述的gRNA表达载体表达SEQ ID NO.22所示的gRNA，其靶点如SEQ ID NO.18所示。本发明针对猪ADCY3基因设计了四个gRNA，从中筛选高效gRNA后再进行预设靶点的敲除，可有效降低后期单克隆细胞鉴定筛选的工作量，并可直接用PCR产物测序来检测基因编辑效率。
本发明公开了基因编辑系统在制备SMN1基因突变的脊髓性肌萎缩症模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了SEQ ID NO：16所示SMN1‑gRNA3、SEQ ID NO：17所示SMN1‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法：将SMN1‑gRNA3、SMN1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为SMN1基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为：制备重组猪细胞；制备脊髓性肌萎缩症模型猪；制备脊髓性肌萎缩症细胞模型或脊髓性肌萎缩症组织模型或脊髓性肌萎缩症器官模型。本发明对于脊髓性肌萎缩症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了一种用于猪APOE和LDLR基因编辑的CRISPR/Cas9系统，包含Cas9表达载体和针对猪APOE和LDLR基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.2所示的pU6gRNA‑eEF1a‑mNLS‑hSpCas9‑EGFP‑PURO载体。本发明采用CRISPR/Cas9基因编辑技术，将猪的APOE和LDLR基因敲除，制备出APOE和LDLR基因双敲除的猪重组细胞，为进一步的通过体细胞克隆技术生产动脉粥样硬化克隆猪奠定坚实基础，进而为动脉粥样硬化疾病的治疗及发病机制的研究提供有力的实验工具。
本发明公开了构建SPR基因突变的墨蝶呤还原酶缺乏症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示SPR‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示SPR‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法：将SPR‑gRNA1、SPR‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为SPR基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备墨蝶呤还原酶缺乏症模型猪；制备墨蝶呤还原酶缺乏症细胞模型或墨蝶呤还原酶缺乏症组织模型或墨蝶呤还原酶缺乏症器官模型。本发明对于墨蝶呤还原酶缺乏症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了构建ABCA12基因突变的斑色鱼鳞癣模型猪核移植供体细胞的试剂盒及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示ABCA12‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示ABCA12‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法：将ABCA12‑gRNA1、ABCA12‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为ABCA12基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为：制备重组猪细胞；制备斑色鱼鳞癣模型猪；制备斑色鱼鳞癣细胞模型或斑色鱼鳞癣组织模型或斑色鱼鳞癣器官模型。本发明对于斑色鱼鳞癣药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了构建ZMPSTE24基因突变的早衰症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示ZMPSTE24‑gRNA2、SEQ ID NO：17所示ZMPSTE24‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法：将ZMPSTE24‑gRNA2、ZMPSTE24‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为ZMPSTE24基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组猪细胞；制备早衰症模型猪；制备早衰症细胞模型或早衰症组织模型或早衰症器官模型。本发明对于早衰症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了构建PAH基因突变的苯丙酮尿症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示PAH‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示PAH‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法：将PAH‑gRNA1、PAH‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为PAH基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备苯丙酮尿症模型猪；制备苯丙酮尿症细胞模型或苯丙酮尿症组织模型或苯丙酮尿症器官模型。本发明对于苯丙酮尿症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了构建BRCA1基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示BRCA1‑gRNA3、SEQ ID NO：17所示BRCA1‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法：将BRCA1‑gRNA3、BRCA1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为BRCA1基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备乳腺癌模型猪；制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。本发明对于乳腺癌药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
