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[发明专利]滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法-CN201210277918.1无效
发明人：杨君兴;王晓爱;潘晓赋;陈小勇 -专利权人：中国科学院昆明动物研究所
申请日： 2012-08-07 - 公布日： 2012-11-07 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法，属于低温生物学技术领域。方法为：选择性成熟的优质原种或良种，用100 ppm的MS-222麻醉5 min，挤压擦干的腹部，成熟精液流入1.5 mL离心管，检测鲜精活力，活力在85%以上的精液用于冷冻。将精液与抗冻液（D-15+7.5%乙二醇）按体积比1：2的比例稀释，分装，4℃平衡60 min，在液氮面上方6 cm处平衡2 min，液氮面上平衡2 min后投入液氮中保存。精子复苏方法是在37℃水浴快速晃动20 s解冻，将挤出的滇池金线鲃鱼卵与解冻后的精液按1：105的数量比混合使卵受精。本发明具有成本低，操作简便，保存时间长，复苏后精子的活力较高，人工繁殖的滇池金线鲃鱼的受精率和孵化率较高，能投入规模生产的优点；对于开展鱼类资源恢复与重建也具有重要意义。
滇池金线鲃精子超低温冷冻保存复苏方法

[发明专利]一种暗色唇鱼精子超低温冷冻保存方法-CN201210277522.7无效
发明人： 王晓爱;潘晓赋;杨君兴;陈小勇 -专利权人：中国科学院昆明动物研究所
申请日： 2012-08-07 - 公布日： 2012-11-07 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：一种暗色唇鱼精子超低温冷冻保存方法，属于低温生物学技术领域。本发明的方法为：选择达到性成熟的优质原种或良种，用100ppm的MS-222麻醉5min，轻轻挤压擦干的腹部，成熟的精液流入5mL离心管中，检测鲜精活力，活力在85%以上的精液样品用于精子冷冻。将采集的优质精液与抗冻液（D-15+5%甲醇）按三步稀释法稀释，使精子终密度为2.5×108个/mL，分装入1.8ml冻存管中，4℃平衡30min，液氮面上6cm平衡10min，液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。使用时将保存的精子在40℃水浴中解冻，进行人工授精。本发明具有成本低，操作简便，保持时间长，复苏后精子的活力较高，人工繁殖的暗色唇鱼的受精率和孵化率较高，能投入规模生产的优点；对于开展鱼类资源恢复与重建也具有重要意义。
一种暗色精子超低温冷冻保存方法

[发明专利]一种鱇浪白鱼肌肉细胞系的构建方法-CN201210277865.3有效
发明人： 王晓爱;杨君兴;潘晓赋;陈小勇 -专利权人：中国科学院昆明动物研究所
申请日： 2012-08-07 - 公布日： 2012-10-31 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种鱇浪白鱼肌肉细胞系的构建方法，属于淡水生物细胞培养技术领域。该方法首先配制细胞培养液，以鱇浪白鱼肌肉组织为材料，清洗剪碎后，接种于25cm2培养瓶中，置于28℃培养箱培养。每隔3天半量更换培养液，待细胞长成单层后，采用胰蛋白酶消化法进行传代。5天传代一次，传至第10代时，培养液中血清浓度降至10%，此时细胞系建立成功。本发明的有益效果在于：1、操作简便易行；2、所构建的鱇浪白鱼肌肉细胞系（AGM）细胞生长状态良好，形态为成纤维样细胞，能连续传代50代以上，能直接用于鱇浪白鱼细胞生物学特性及免疫抗病基因功能的研究；3、该构建方法也适用于其他鱼类肌肉细胞系。
一种白鱼肌肉细胞系构建方法

[发明专利]一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法-CN201210277940.6有效
发明人： 王晓爱;杨君兴;潘晓赋;陈小勇 -专利权人：中国科学院昆明动物研究所
申请日： 2012-08-07 - 公布日： 2012-10-31 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法，属于淡水水生生物细胞培养技术领域。鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法，是以鱇浪白鱼尾鳍组织细胞为材料，采用组织块法启动原代培养，在含有胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子的pH值为7.0-7.4的DMEM/F12培养基中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。本发明的有益效果在于：1、在保证鱼体存活的前提下，操作简便易行；2、构建的鱇浪白鱼鳍细胞系（AGF）形态为成纤维样细胞，细胞生长状态良好，能够连续传代，直接用于鱇浪白鱼细胞生物学特性及功能基因的研究，满足了对鱇浪白鱼分子细胞水平理论研究的需要；3、该构建方法也适用于其他鱼类构建鳍条的细胞系。
一种白鱼细胞系构建方法

[发明专利]滇池金线鲃鳍细胞系的构建方法-CN201210277861.5无效
发明人：杨君兴;王晓爱;潘晓赋;陈小勇 -专利权人：中国科学院昆明动物研究所
申请日： 2012-08-07 - 公布日： 2012-10-31 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种滇池金线鲃鳍细胞系的构建方法，属于淡水水生生物细胞培养技术领域。该方法是以滇池金线鲃鳍条组织为材料，采用组织块法，在含有胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子，pH值为7.2-7.4的L-15培养液中培养；采用胰蛋白酶消化法进行继代培养；具体包括制备细胞培养液、鳍组织微创取样、原代培养及传代培养步骤。本发明的有益效果在于：1、采用微创处理，在保证鱼体存活的前提下，操作简便易行；2、构建的滇池金线鲃鳍细胞系形态为成纤维样，能够连续传代并直接应用于生物学特性研究，满足了对滇池金线鲃种质资源保存和理论研究及应用的需要；3、该构建方法也适用于其他鱼类构建鳍条的细胞系。
滇池金线鲃鳍细胞系构建方法

[实用新型]新型自动铅笔-CN200520095486.8无效
发明人： 王晓爱 -专利权人： 王晓爱
申请日： 2005-03-10 - 公布日： 2006-05-24 - 主分类号： B43K29/02 文献下载
摘要：本实用新型公开一种新型自动铅笔，该新型自动铅笔设有一笔筒，笔筒内有一笔芯筒，笔筒前部设有笔帽，笔帽的一侧设有压芯螺丝，笔筒的后部设有笔盖，笔盖内设有橡皮擦。本实用新型的优点在于：使用的塑料笔杆可无数次重复使用，无须刨削，也就不会产生任何垃圾。该铅笔结构简单，使用方便。
新型自动铅笔