本发明是有关于一种基于荧光定量PCR的端粒长度检测方法,包括以下步骤:提取基因组DNA;进行荧光定量PCR检测,用引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2检测端粒重复序列,用引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4检测人酸性核糖体磷酸化蛋白PO的36B4基因序列;计算相对端粒长度T/S;并可根据推导出的公式进一步计算端粒的绝对长度。本发明以Eva Green为染料,采用荧光定量PCR方法检测端粒长度的端粒引物以及内参照引物,并基于大样本分析的端粒TRF长度与T/S比值之间的线性回归方程推导端粒TRF长度与T/S比值之间的换算关系,从而提供了适合临床使用的端粒长度检测方法。
本发明公开了一种腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒,包括PCR反应液、引物探针组合、阳性质控品、阴性质控品,还包括核酸提取用液及核酸提取用内参照品;所述内参照品为灭活的T4噬菌体,所述引物探针组合包括腺病毒核酸用引物探针(通用:SEQ ID NO4-6;分型SEQ ID NO7-9)及内参照品用引物探针(SEQ ID NO1-3),其中SEQ ID NO3、6、9的5’端连接荧光报告基团,3’端连接荧光淬灭基团;本发明还公开了上述试剂盒的使用方法,在荧光定量PCR检测反应前还采用核酸提取用液进行病毒核酸提取,并在病毒核酸提取过程中加入所述内参照品;本发明的试剂盒及其使用方法具有使用便捷、检测结果准确的特点,其不仅可以对所有腺病毒进行检测,还可以对B和E亚群进行分型。