本发明提供了一种基于CRISPR‑Cas9系统构建的能分泌小鼠白细胞介素‑6的基因工程细胞株。本发明首先提供了特异性靶向小鼠ROSA26基因的sgRNA,其靶序列如SEQ ID NO.1所示,进而构建能同时表达所述sgRNA和Cas9蛋白的定点切割载体;本发明还构建了含有小鼠白细胞介素‑6和ROSA26基因同源序列的donor载体,在小鼠细胞SP2/0的ROSA26位点定点整合小鼠白细胞介素‑6,并通过筛选标记筛选获得纯合细胞系,获得高表达小鼠白细胞介素‑6的基因工程细胞株,本发明的细胞株可用于生产具有高比例分泌能力的杂交瘤细胞,在单克隆抗体制备领域具有广阔的应用前景。