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[发明专利]利用特征六肽制备柞蚕丝素蛋白抗体的方法-CN201510772674.8有效
发明人： 游秋实;王秉;彭志勤;胡智文 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2015-11-12 - 公布日： 2019-03-05 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本发明公开一种利用特征六肽制备柞蚕丝素蛋白抗体的方法,合成序列为“GSGAGG”的六肽，将六肽和匙孔血蓝蛋白偶联起来得到完全抗原；用生理盐水稀释完全抗原，将稀释后的完全抗原与Quick Antibody‑Rabbit 5W佐剂均匀混合，然后对兔子进行初次免疫，然后对兔子进行加强免疫，加强免疫使用的试剂与初次免疫一致；当兔子血样中的抗体的效价达到1:10000时，收集免疫后的兔子血液，并使血块充分收缩及抗血清完全析出，然后收集抗血清并离心处理得到上清液，分装备用。本发明方法简单快捷，且制备的抗体具有很强的特异性，能用于检测纺织品中的丝素蛋白。
利用特征制备柞蚕丝素蛋白抗体方法

[发明专利]利用特征十肽制备柞蚕丝素蛋白抗体的方法-CN201510769917.2有效
发明人：胡智文;游秋实;王秉;刘意 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2015-11-12 - 公布日： 2019-03-05 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本发明公开一种利用特征十肽制备柞蚕丝素蛋白抗体的方法，合成序列为“AAAAAAAAAA”的多肽，将多肽和匙孔血蓝蛋白偶联起来得到完全抗原；用生理盐水稀释完全抗原，将稀释后的完全抗原与Quick Antibody‑Rabbit 5W佐剂均匀混合，然后对兔子进行初次免疫，然后对兔子进行加强免疫，加强免疫使用的试剂与初次免疫一致；当兔子血样中的抗体的效价达到1:10000时，收集免疫后的兔子血液，并使血块充分收缩及抗血清完全析出，然后收集抗血清并离心处理得到上清液，分装备用。本发明方法简单快捷，且制备的抗体具有很强的特异性，能用于检测纺织品中的丝素蛋白。
利用特征制备柞蚕丝素蛋白抗体方法

[发明专利]一种区分蚕丝种类的检测方法-CN201510769490.6有效
发明人： 游秋实;王秉;万军民;胡智文 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2015-11-12 - 公布日： 2017-07-28 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种区分蚕丝种类的检测方法,利用不同特征多肽制备蚕丝素蛋白特异抗体来在间接酶联免疫的方法中检测不同种类蚕丝的丝素蛋白成分，即将蚕丝素蛋白洗脱液包被到酶标板上，然后添加兔抗丝素蛋白抗体与抗原结合形成抗原抗体复合物。洗涤后加入碱性磷酸酯酶标山羊抗兔IgG(H+L)抗体，形成抗体‑抗原‑抗体复合物，洗涤加入TMB显色液，底物被酶催化为有色产物，根据产物颜色变化的深浅进行定性分析。该方法操作简单，灵敏度高，优于常规检测方法。
一种区分蚕丝种类检测方法

[发明专利]一种区分羊皮种类的检测方法-CN201610099915.1有效
发明人：胡智文;游秋实;王秉;刘意 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-02-24 - 公布日： 2017-06-23 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种区分羊皮种类的检测方法，利用不同特征多肽制备山羊皮/绵羊皮I型胶原蛋白抗体来在间接酶联免疫的方法中检测不同种类羊皮的I型胶原蛋白成分，即将羊皮I型胶原蛋白洗脱液包被到酶标板上，然后添加兔抗I型胶原蛋白抗体与抗原结合形成抗原抗体复合物，洗涤后加入碱性磷酸酯酶山羊抗兔IgG(H+L)抗体，形成抗体‑抗原‑抗体复合物，洗涤加入底物显色液，底物被酶催化为有色产物，根据产物颜色变化的深浅可进行定性分析。本发明方法简单快捷，灵敏度高，并且可以避免其他蛋白质干扰，特异性强。
一种区分羊皮种类检测方法

[发明专利]一种古代羊毛织品间接竞争法检测试纸的制备方法-CN201610078943.5在审
发明人： 游秋实;王秉;刘意;刘杨 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-02-04 - 公布日： 2016-06-29 - 主分类号： G01N33/558 文献下载
摘要：本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种古代羊毛织品间接竞争法检测试纸的制备方法，包括：向PBS缓冲液中加入荧光微球、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液和兔抗角蛋白抗体溶液，搅拌均匀后用牛血清蛋白溶液封闭后离心处理，将沉淀加入到PBS缓冲液中复溶混匀，制得荧光标记兔抗角蛋白抗体溶液。将羊毛角蛋白稀释液和山羊抗兔抗体稀释液分别喷在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，烘干备用；将荧光标记兔抗角蛋白抗体溶液稀释后包被在荧光结合垫上，烘干备用；将样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装并切割成条，制得检测试纸。本发明操作简单，检测试纸成本低，反应时间短，灵敏度高，适合考古现场的检测。
一种古代羊毛织品间接竞争检测试纸制备方法

[发明专利]一种利用免疫荧光测定古代羊毛织品的检测方法-CN201610092565.6在审
发明人： 游秋实;王秉;刘杨;刘意 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-02-19 - 公布日： 2016-06-22 - 主分类号： G01N33/533 文献下载
摘要：本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种利用免疫荧光测定古代羊毛织品的检测方法，包括：A）将三块文物样放于A、B、C三个打孔皿中；用PBS缓冲液对文物样进行洗涤；向A中加入兔抗羊毛角蛋白抗体稀释液，C中加入PBS溶液；冷藏后向各打孔皿中加入PBS溶液，浸泡、洗涤；B）向A、B中加入绿色荧光素标记山羊抗兔IgG（H+L）抗体稀释液，C中加入PBS溶液；将A、B、C避光孵育；然后向各打孔皿中加入PBS溶液，浸泡，洗涤；C）向A，B，C中加入缓冲甘油进行封片；D）将A，B，C放置于激光共聚焦显微镜下进行观察检测。本发明方法灵敏度高，操作简单，成本低，结果直观，易于分析。
一种利用免疫荧光测定古代羊毛织品检测方法

[发明专利]一种古代羊毛的特异性免疫检测方法-CN201610102038.9在审
发明人：王秉;游秋实;刘意;刘杨 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-02-24 - 公布日： 2016-06-22 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种古代羊毛的特异性免疫检测方法，采用以下步骤：a.荧光标记特异性羊毛抗体的制备；b.试纸的组装；c.试纸的灵敏性检测；d.古代羊毛的特异性免疫检测。利用本发明方法制备的检测试纸对古代羊毛微痕迹进行检测时，具有快速、准确、高灵敏性的特点。
一种古代羊毛特异性免疫检测方法

[发明专利]一种古代牛毛微痕迹荧光检测试纸的制备方法-CN201610100863.5在审
发明人：王秉;游秋实;刘意;刘杨 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-02-24 - 公布日： 2016-06-15 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种古代牛毛微痕迹荧光检测试纸的制备方法，采用以下步骤：a.荧光标记牛毛检测抗体的制备：采用EDC介导法偶联铕标记聚苯乙烯纳米球和牛毛检测抗体，制得荧光标记牛毛检测抗体；b.试纸的组装：将荧光标记牛毛检测抗体喷涂在玻璃纤维素膜上，进行干燥；将牛毛角蛋白抗原和山羊抗兔抗体分别划在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，进行干燥；分别将样品垫、荧光标记结合垫、硝酸纤维素膜垫和吸水垫组装在PVC底板上，将组装好的板条切成条状，制得检测试纸，装于塑料卡中备用。利用本发明方法制备的检测试纸对古代牛毛微痕迹进行检测时，具有快速、准确、高灵敏性的特点。
一种古代牛毛痕迹荧光检测试纸制备方法

[发明专利]一种利用特征诊断序列制备山羊毛检测抗体的方法-CN201610100033.2在审
发明人：王秉;游秋实;刘意;刘杨 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-02-24 - 公布日： 2016-06-15 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种利用特征诊断序列制备山羊毛检测抗体的方法，采用如下步骤：a.特征诊断序列的合成；b.特征诊断序列与载体的偶联；c.初次免疫；d.抗血清制备；e.山羊毛检测抗体的纯化。本发明方法制备的山羊毛检测抗体具有高灵敏性和高特异性。
一种利用特征诊断序列制备山羊检测抗体方法

[发明专利]一种绵羊角蛋白抗体的制备方法-CN201610078877.1在审
发明人：胡智文;游秋实;刘意;王秉 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-02-04 - 公布日： 2016-06-08 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本发明涉及文物考古技术领域，公开了一种绵羊角蛋白抗体的制备方法，包括：A）角蛋白提取；B）抗原制备、免疫、血液收集；C）抗血清分离；D）抗体的制备。本发明方法制备的绵羊角蛋白抗体对绵羊角蛋白的反应灵敏度高，所需使用的抗原量极少。
一种绵羊角蛋白抗体制备方法

[发明专利]一种利用显微镜检测古代羊毛织品的方法-CN201510768133.8在审
发明人：胡智文;刘建军;王秉;游秋实 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2015-11-12 - 公布日： 2016-03-02 - 主分类号： G01N33/558 文献下载
摘要：一种利用显微镜检测古代羊毛织品的方法，包括如下步骤：A)PBS 7.4缓冲液配制；B)从文物样里面抽取三根单纤，分别放置于打孔皿中，标记为①，②，③；用PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向①中加入兔抗角蛋白多克隆抗体；②，③中加入PBS缓冲液，然后放置于冰箱过夜；分别加入PBS溶液于打孔皿中，浸泡洗涤；C)分别向①，②中加入胶体金标记山羊抗兔lgG(H+L)抗体，③中加入PBS溶液；然后分别将①，②，③放置于有湿毛巾垫着的盒子里，孵育；分别加入PBS溶液于打孔皿中，浸泡洗涤；再用盖玻片封片；D)将①，②，③放置于显微镜下进行观察；比较测得的结果：②，③未发生颜色变化，而①呈现较亮的红色，说明文物样与兔抗角蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为羊毛织品。
一种利用显微镜检测古代羊毛织品方法

[发明专利]一种古代羊毛织品中角蛋白的检测方法-CN201510767286.0在审
发明人：刘杨;王秉;游秋实 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2015-11-12 - 公布日： 2016-02-24 - 主分类号： G01N33/535 文献下载
摘要：本发明公开了一种古代羊毛织品中角蛋白的检测方法，利用间接酶联免疫的方法来检测古代羊毛织品中角蛋白成分，即将羊毛织品文物洗脱液包被到酶标板上，然后添加兔抗角蛋白抗体和抗原形成抗原抗体复合物。洗涤后加入碱性磷酸酯酶标山羊抗兔lgG（H+L）抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物，洗涤加入TMB显色液，底物被酶催化为有色产物，根据产物颜色变化深浅进行定性分析。本发明的有益效果是：1、本发明提取角蛋白中采用阴离子表面活性剂SDBS成本低，临界胶束浓度低，用量少。2、本发明采用间接酶联免疫的方法对羊毛织品中的角蛋白成分进行检测，一方面灵敏度高、操作简单。另一方面，避免了其它蛋白的干扰，特异性强。
一种古代羊毛织品角蛋白检测方法

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