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[发明专利]含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA重组母质粒、含该表达盒的微环DNA及应用-CN201310503003.2在审
发明人：陈志英;马飞;何成宜 -专利权人：深圳先进技术研究院;深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2013-10-23 - 公布日： 2015-04-29 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA重组母质粒及其制备方法，该微环DNA重组母质粒能在宿主菌内完成位点特异性重组，消除原核质粒元件，形成含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA；本发明还提供了一种含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA及其制备方法和应用，该微环DNA可在宿主细胞内稳定、持久地表达重组嵌合抗原受体基因，是一种高效、安全的基因治疗载体；其次，本发明还提供了一种含有该微环DNA的宿主细胞及其制备方法和应用；此外，本发明还提供了一种重组嵌合抗原受体及其制备方法和应用。
重组嵌合抗原受体基因表达 dna 质粒应用

[发明专利]含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒、含该表达盒的微环DNA及应用-CN201310339305.0在审
发明人：陈志英;马飞;何成宜 -专利权人：深圳先进技术研究院;深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2013-08-06 - 公布日： 2015-02-11 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供了一种含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒及其制备方法，该微环DNA重组母质粒能在宿主菌内完成位点特异性重组，消除原核质粒元件，形成含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA；本发明还提供了一种含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA及其制备方法和应用，该微环DNA可在宿主细胞内稳定、持久地表达基因工程抗体基因，是一种高效、安全的基因治疗载体；其次，本发明还提供了一种含有该微环DNA的宿主细胞及其制备方法和应用；此外，本发明还提供了一种基因工程抗体及其制备方法和应用。
基因工程抗体基因表达 dna 重组质粒应用

[发明专利]抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞的制备方法-CN201410169608.7在审
发明人：张鸿声;张艳磊;罗晓玲;王宇环 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2014-04-24 - 公布日： 2014-08-27 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，包括步骤：A）携带肿瘤抗原基因重组载体的构建；B）DC细胞的分离与培养；C）使用步骤A）所述重组载体转导步骤B）所述的未成熟DC细胞；D）进一步通过细胞因子诱导步骤C）所述的未成熟DC细胞成为成熟DC细胞；E）将步骤D）所述的成熟DC细胞与T淋巴细胞共培养，获得具有抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞。本发明优选同时转导可用于表达CEA、MAGE-A3、MUC1三种广谱肿瘤抗原的慢病毒混合载体转导未成熟DC细胞，获得经活化和增殖的肿瘤抗原特异性的T细胞，具有广阔的应用前景。
抗原特异性细胞毒性淋巴细胞制备方法

[发明专利]一种高毒性、高增值能力的人D-CIK细胞的专用试剂盒-CN201310651747.9无效
发明人：马飞;魏宗科;朱利军 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2013-12-04 - 公布日： 2014-04-30 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种高毒性、高增值能力的人D-CIK细胞制备的专用试剂盒。该人D-CIK细胞专用试剂盒由单核细胞分离获取培养基、促DC诱导分化培养基、促DC成熟剂、肿瘤抗原、强化细胞毒活性培养基、细胞激活增值培养基、CD3+CD8+T淋巴细胞诱导分化培养基、细胞扩增培养基组成。通过试剂盒所制备的D-CIK细胞与CIK细胞比较，增值活性和细胞毒活性更强，同时具有制备工艺简单、成本低廉、易于规模化生产等优势。通过本发明所制备的D-CIK细胞，其应用主要为癌症病人的治疗或者癌症高危人群的预防。
一种毒性增值能力 cik 细胞专用试剂盒

[发明专利]人树突状细胞疫苗制备的专用试剂盒-CN201310638797.3有效
发明人：马飞;黄浩;申珊珊 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2013-12-04 - 公布日： 2014-03-19 - 主分类号： A61K39/00 文献下载
摘要：本发明属于细胞免疫学技术领域，具体地说是一种能够大量分泌IL-12的人树突状细胞疫苗制备的专用试剂盒，该试剂盒由单核细胞分离获取培养基、促DC诱导分化培养基、促DC成熟剂和肿瘤抗原组成。通过本发明所制备的DC，其应用主要为癌症病人的治疗或者癌症高危人群的预防。本发明的优点是制备的DC能够分泌大量的IL-12，从而促使T细胞向Th1型免疫应答方向分化，同时具有制备工艺简单、成本低廉、易于规模化生产等优势。
树突细胞疫苗制备专用试剂盒

[发明专利]人CD3+CD8+CIK细胞的制备方法-CN201310638798.8无效
发明人：马飞;王宇环;罗晓玲 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2013-12-04 - 公布日： 2014-03-19 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明属于细胞免疫学技术领域，具体地说是一种人CD3+CD8+CIK细胞的制备方法。本发明包括如下步骤：(1)采集外周静脉血并分离外周血单个核细胞；(2)将细胞重悬于含10％自体血浆的无血清培养基中，并加入终浓度为1000IU/ml的IFN-γ；(3)培养24小时后加入抗CD3单抗、抗CD28单抗、IL-1α、IL-2，48小时后加入卡介苗；(4)以后每2～3天补加含有IL-2的新鲜培养基，培养21天。通过本发明所制备的人CD3+CD8+CIK细胞，其应用主要为癌症病人的治疗或者癌症高危人群的预防。本发明的优点是总细胞扩增效率在21天是现有技术的2倍左右；更为重要的是，本发明扩增的CD3+CD8+T淋巴细胞较现有技术数量明显提高，从先现有技术CIK细胞比例的60％提高到90％左右，而且其杀瘤活性明显提高。
cd3 cd8 cik 细胞制备方法

[发明专利]人树突状细胞疫苗的制备方法-CN201310638796.9有效
发明人：马飞;王宇环;罗晓玲 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2013-12-04 - 公布日： 2014-02-26 - 主分类号： A61K39/00 文献下载
摘要：本发明属于细胞免疫学技术领域，具体地说是一种人树突状细胞疫苗的制备方法。本发明包括如下步骤：(1)通过贴壁法从外周血单个核细胞中分离单核细胞；(2)使用DC培养基诱导单核细胞向DC分化并在第三天加入肿瘤抗原；(3)第五天加入IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ和Mtb-HAg组合型DC促成熟剂；(4)第6～7天进行DC的成熟度和IL-12分泌量检测。通过本发明所制备的DC，其应用主要为癌症病人的治疗或者癌症高危人群的预防。本发明的优点是制备的DC能够分泌大量的IL-12，从而促使T细胞向Th1型免疫应答方向分化，同时具有制备工艺简单、成本低廉、易于规模化生产等优势。
树突细胞疫苗制备方法

[发明专利]一种人γδT细胞的形态学、纯度及免疫表型检测方法-CN201310474485.3有效
发明人：马飞;王宇环;罗晓玲 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2012-02-10 - 公布日： 2014-02-12 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明属于细胞免疫学技术领域，具体地说是一种人γδT细胞的形态学、纯度及免疫表型检测方法。用于检测制成的人γδT细胞。本发明包括以下步骤：制备人γδT细胞后通过显微镜进行形态学观察、流式细胞仪进行纯度和免疫表型分析。本发明的优点是：检验获得的γδT细胞具有数量大、纯度高、细胞毒性强等特点，从而确保制成的人γδT细胞能够满足临床的需要，而且实现了IPP等非肽磷酸类抗原、抗TCRγδ抗体等刺激剂相比培养成本大大降低；解决了现有技术体外培养γδT细胞数量低、毒性弱、成本高等问题的效果。
一种细胞形态学纯度免疫表型检测方法

[实用新型]一种新型试管架-CN201220054930.1有效
发明人：商冠冠;王宇环;罗晓玲 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2012-02-17 - 公布日： 2012-12-26 - 主分类号： B01L9/06 文献下载
摘要：一种新型试管架，主要包括底板、支架和试管孔。长条形底板的塑料聚酯上表面覆盖一层不锈钢表面，底板的前右两侧面具有两排纵切面为梯形的圆柱形凸起，左后两侧面具有两排凹入的圆形小洞，多个长条形底板可通过边侧面的凸起和凹入小洞拼接成更大的底板。每两个栅栏状试管孔为一组，并且与支架一体成型，即两孔支架。每个两孔支架的低端为一密闭小室，小室内含有一块强力磁铁，可以将两孔支架牢牢的吸附在底板表面；孔架的前右两侧面具有两排纵切面为梯形的圆柱形凸起，左后两侧面具有两排相匹配的凹槽。不同的两孔支架可通过侧表面的凸起和凹槽连接成具有不同试管孔洞的孔架，并通过低端的强力磁铁牢牢的吸附在底板上，构成完整的试管架。本实用新型除具有一般试管架的功能外，还可以方便的拆卸，并根据需要，拼装成不同大小和形状的试管架，便于消毒和实验操作，以及有效利用培养箱和冰箱内的空间。当我们在一些亲磁性台面进行实验时，如：超净台，也可直接将拼接好的不同形状的孔架通过强磁力固定在台面上，不但能有效利用有限空间，还可以方便实验操作。
一种新型试管架

[实用新型]自体免疫细胞治疗采血用采血瓶-CN201120241043.0有效
发明人：马飞;王宇环;罗晓玲 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2011-07-08 - 公布日： 2012-08-15 - 主分类号： A61J1/05 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种医疗设备技术领域，特别是一种用于自体免疫细胞治疗采血用采血瓶，包括采血针接头、采血瓶本体和负压转换接头，其特征在于：采血瓶本体通过与瓶塞密封连接的采血管和负压管分别与采血针接头和负压转换接头连接，采血针接头为漏斗型结构，便于手持以插采血针，负压转换接头的空气出口管和负压管接头内分别设有瓣膜，以保证气流的单向流动，利于采血瓶内负压的形成；采血针接头和负压转换接头上的注射器接头能够分别与市售的一次性采血针和注射器配合使用，采血瓶本体上并设有标签袋。本实用新型的优点是：结构简单、使用方便、病人信息保存完整、不会造成污染以及负压可控等优点。
免疫细胞治疗采血

[发明专利]一种简单高效制备人γδT细胞的方法-CN201210030197.4有效
发明人：马飞;王宇环;罗晓玲 -专利权人： 深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2012-02-10 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明属于细胞免疫学技术领域，具体地说是一种体外大量优势扩增人外周血γδT细胞的方法。本发明包括以下步骤：(1)用培养的结核杆菌制备结核杆菌耐热性抗原；(2)用制备的结核杆菌耐热性抗原，联合细胞因子rhIL-2和rhIL-21刺激扩增γδT细胞；(3)通过显微镜进行形态学观察、流式细胞仪进行纯度和免疫表型分析、MTT实验进行细胞毒活性检测。本发明的优点是：培养条件和操作较为简便，能在短时间内制备出大量、高纯度、高细胞毒活性的γδT细胞，并且成本较为低廉。
一种简单高效制备细胞方法

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