本发明公开了检测并鉴定3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR方法,属于微生物检测技术领域。本发明公开用于检测并鉴定3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR扩增引物和探针,包括如下序列:扩增大肠杆菌O157:H7rfbE基因的如SEQ ID NO:1‑3所示引物对和探针;扩增沙门氏菌invA基因的如SEQ ID NO:4‑6所示引物对和探针;以及扩增单增李斯特菌hlyA基因的如SEQ ID NO:7‑9所示的引物对和探针;上述SEQ ID NO:1‑9所示序列在一次检测中共同使用。本发明可为食品中大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌和单增李斯特菌3种食源性致病菌的准确、快速检测提供方法和数据支持。