本发明属于动物传染病防治技术领域,具体涉及一株牛支原体NADH氧化酶的单克隆抗体。该单克隆抗体是由交瘤细胞株8B7分泌的,所述的NADH氧化酶是一种牛支原体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶,本发明修饰的NOX基因的核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。公开了NOX基因的克隆和表达及纯化步骤,重组蛋白质rNOX单克隆抗体的制备步骤以及免疫荧光检测法的建立和初步应用的步骤及效果。所述的杂交瘤细胞株8B7保藏在中国典型培养物保藏中心,其保藏号为CCTCC NOC2014221,该单克隆抗体能特异性地识别牛支原体。