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[发明专利]一种高效、高质量的植物RNA提取方法-CN202211633090.9在审
发明人：叶肖肖;金杰 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2022-12-19 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供一种高效、高质量的植物RNA提取方法，属于生物技术领域，本发明提供一种高效、高质量的植物RNA提取方法，该方法是将植物材料在液氮中充分研磨至粉末状后加入Trizol，振荡离心后加入氯仿，振荡，低温离心后取上清，加入异丙醇，置于‑80冰箱以充分析出RNA沉淀。低温离心，弃上清，用75%乙醇洗涤2次，待沉淀干燥，溶于RNase‑free水中，本发明基于TRIZOL试剂提取植物总RNA，在方法上进行改进，操作稳定性高、可重复性强。所提RNA与试剂盒相比不仅得率高，纯度高，适用性广，而且完整性也好，可用于高要求的生物学实验，如RNA反转录、RT‑PCR、cDNA文库构建等。
一种高效质量植物 rna 提取方法

[发明专利]一种绿色荧光蛋白高效表达的西瓜遗传转化方法-CN202310314169.3在审
发明人：丁圆席;曹乐慧;金杰;杨鹏 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2023-03-28 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明提供一种绿色荧光蛋白高效表达的西瓜遗传转化方法，属于植物基因工程技术领域，包括如下步骤：S1、农杆菌转化外植体：将西瓜种子置于萌发培养基中培育得到外植体，在使用重组后的农杆菌对外植体进行浸染，将浸染后的外植体于共培养培养基上进行暗培养；S2、外植体的筛选：将共培养后的西瓜外植体置于筛选培养基上进行培养，得到含有抗性芽的芽团；S3、目标芽团的培育：将筛选出的阳性抗性芽团置于伸长培养基上培养；S4、目标幼苗的生根筛选：将具有西瓜地上部分的幼苗置入生根筛选培养基中，诱导根的分化，进一步的筛选得到西瓜生根幼苗，本发明能够使得绿色荧光蛋白在西瓜植物上高效表达，提高了转基因表达的成功率以及阳性植株数量。
一种绿色荧光蛋白高效表达西瓜遗传转化方法

[发明专利]一种单链DNA接头及其制备和应用-CN202110333136.4有效
发明人：刘震;杨梦醒;邓逸民 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2021-03-29 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种单链DNA接头及其制备和应用，属于分子生物学技术领；所述单链DNA接头包括一对完全互补的引物，所述引物的末端连接有简并碱基N，所述简并碱基N的数量为6～7个；本发明中所述单链DNA接头的连接是将所述的单链DNA接头的接头Mix与单链DNA，在冰上等体积混合，然后在37℃水浴中孵育15～20min，即可得到连接产物；本发明提供了一种单链DNA接头，通过一个6～7bp随机引物组成的粘性末端，能够与任何序列组合互补，该单链DNA接头能够在单链DNA的3'末端添加已知序列，不但适用于已知序列的单链DNA加接头，还能用于含未知序列的单链DNA加接头，因此在第二代测序技术中有很大的应用潜力。
一种 dna 接头及其制备应用

[发明专利]一种高效低成本鉴定转基因元件插入位点的方法及其应用-CN202111517433.0在审
发明人：李阳;吴磊 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2021-12-13 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效低成本鉴定转基因元件插入位点的方法及其应用，方法包括如下步骤：S1、提取转基因阳性样本全基因组，然后加入Tn5转座酶进行打断建库，得到第一混合物；S2、采用带有barcode序列的引物，经PCR扩增所述第一混合物，得到带有不同barcode序列的第二混合物；S3、纯化所述带有不同barcode序列的第二混合物，然后将纯化后的第二混合物均一混合后，进行高通量测序；S4、对高通量测序数据进行数据分析，鉴定获得转基因元件的插入位点信息；本方法建库流程简单：采用Tn5转座酶建库，流程简单快速；成本低廉：可以进行多样品混测，并且是利用PCR扩增反应靶向富集目标序列侧翼序列，对于测序量要求不高，1G测序量的成本能满足分析几十个样品的分析需求。
一种高效低成本鉴定转基因元件插入方法及其应用

[发明专利]网页内容自动提取方法-CN201811067868.8有效
发明人：王世阳;李阳 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2018-09-13 - 公布日： 2022-01-07 - 主分类号： G06F16/958 文献下载
摘要：本发明属于网页内容提取技术领域，具体涉及一种网页内容自动提取方法，特别是适用于期刊文献摘要页面内容的提取，包括：S1、将HTML重新渲染；S2、对DOM树进行分割；S3、对侯选视觉块进行预标注；S4、对侯选视觉块进行标注。该方法采用快速傅里叶变换(FFT)和对数盖伯滤波器取代传统视觉算法，降低了时间、空间复杂度，提高了算法的时间、空间效率。
网页内容自动提取方法

[发明专利]一种自动删除选择标记的转基因方法-CN202110499325.9在审
发明人：张越;李杨;李阳 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2021-05-08 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学技术领域，具体公开了一种自动删除选择标记的转基因方法。构建包含选择标记的自动删除选择标记的转基因载体，转化至植物中获得愈伤组织；所述选择标记基因可以正常表达，加入细胞分裂素后，诱导选择标记基因自动删除；所述自动删除选择标记的转基因载体的DNA序列按照“载体骨架‑‑‑loxP‑‑‑Arr5‑‑‑Cre‑‑‑选择标记‑‑‑loxP‑‑‑载体骨架”排列。本发明的转基因载体包含Cre/loxP重组系统，且选择标记、Arr5启动子基因和Cre基因位于两个loxP位点之间，Arr5启动子可启动Cre重组酶表达，进而诱导loxP重组反应以将两个loxP位点间的DNA序列删除，由此实现选择标记基因的删除，为转基因植物的安全性提供一条可能的技术途径。
一种自动删除选择标记转基因方法

[发明专利]一种获得已知TDNA侧翼序列插入基因组位点的方法-CN202110499333.3在审
发明人：李阳;张越 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2021-05-08 - 公布日： 2021-07-13 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明属于转基因技术领域，具体公开了一种获得已知TDNA侧翼序列插入基因组位点的方法。本发明通过农杆菌转化法得到转基因植株，插入植物基因组的部分为转基因载体上LB到RB区间的部分，通过已知的TDNA侧翼序列中的LB—RB区间得到插入位置附近植物基因组序列信息，从而得到转基因插入基因组的位置信息；另外，本发明不需要繁琐的实验过程以及大量的测序分析，就可得到基因组序列信息，通过一次PCR程序即可完成特异性片段的富集，在一代测序的少量数据中即可分析得到插入位置的信息，简单高效，具有一定的应用前景。
一种获得已知 tdna 侧翼序列插入基因组方法

[发明专利]一种通过原生质体快速验证启动子强弱的方法-CN201610837885.X有效
发明人：李阳;孙智光 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2016-09-21 - 公布日： 2020-05-05 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提出了一种通过原生质体快速验证启动子强弱的方法，通过在同一个载体上用目标启动子和参考启动子分别驱动同一种荧光蛋白，在同一个细胞中表达，但是分别定位在不同的亚细胞位置，然后再利用同一个激光束激发荧光蛋白，此种情况下所有的其他参数都是一致的情况下，不同的亚细胞位置上的荧光亮度就可以代表启动子的强度，通过与参考启动子比较可以定量分析出目标启动子与参考启动子的倍比关系。本发明只需构建一次插入了待验证启动子序列的载体，然后用构建好的载体转化原生质体再在激光共聚焦显微镜下观察拍照通过比较对照启动子产生的荧光强度和需验证的启动子产生的荧光强度的方式快速评价启动子活性的强弱。
一种通过原生质体快速验证启动子强弱方法

[发明专利]一种区分DNA中5-甲基化胞嘧啶和5-羟甲基化胞嘧啶的方法-CN201910624669.0在审
发明人：刘震;李阳 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2019-07-11 - 公布日： 2019-12-03 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明属于表观遗传学技术领域，具体涉及一种区分DNA中5‑甲基化胞嘧啶和5‑羟甲基化胞嘧啶的方法。该方法基于APOBEC3A对5‑mC和5‑hmC脱氨基转化的差异性，直接将被检测位点作为特异性引物的3’末端，qPCR扩增后不同的甲基化修饰会产生不同的扩增Ct值，根据酶转化产物和阴性对照之间的Ct值差异，从而快速区分被检测位点的修饰是甲基化修饰还是羟甲基化修饰，提高了分析时效性，节约了二次测序成本。该方法转化过程对DNA几乎无损伤作用，可利用低至1ng的样本DNA完成分析，能够广泛应用于DNA表观遗传分析领域。
甲基化修饰羟甲基化扩增位点修饰甲基化胞嘧啶表观遗传学特异性引物遗传分析阴性对照样本DNA 胞嘧啶差异性酶转化时效性脱氨基无损伤检测测序转化分析节约应用

[发明专利]一种消除植物组织培养箱中培养皿凝结水的方法及其装置-CN201811610766.6在审
发明人：李阳 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2018-12-27 - 公布日： 2019-04-30 - 主分类号： C08L69/00 文献下载
摘要：本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种消除植物组织培养箱中培养皿凝结水的方法及其装置，所述方法控制培养皿的透光率为70～80％、培养箱中光照强度为5905～13287lux。本发明的技术方案通过严格控制培养皿的透光率在70～80％范围内，从而调整了提供给大面积植物叶片的光照强度，保证光能转化的热效应使植物叶片表面的温度与培养皿盖的温度相同，从而避免了高温度的水蒸气在培养皿盖上凝结；再通过增加培养箱内光照强度来对植物生长所需的光照进行弥补，满足植物正常生长的条件。该方法技术方案简单，基于该方法制备的培养皿可广泛应用于各种类型的组培箱中。
培养皿光照植物组织培养培养皿盖凝结水透光率箱中热效应植物组织培养技术植物叶片表面水蒸气方法控制光能转化植物叶片培养箱组培箱制备凝结生长应用保证

[发明专利]通过优化培养皿吸收光谱消除培养皿凝水的方法及培养皿-CN201811612168.2在审
发明人：李阳 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2018-12-27 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种通过优化培养皿吸收光谱消除培养皿凝水的方法及培养皿。基于植物生长对红光和蓝光利用率高、对绿光利用率低的事实，本发明的技术方案通过采用能特定吸收绿光、同时通过红光和蓝光的培养皿来进行植物组织培养。绿光用于给培养皿上盖加热，红光和蓝光用于植物生长。本发明的培养皿结合组培箱应用于植物组培时，无须提高培养箱的光源强度即可解决消除培养皿凝水和植物生长的双重问题。本发明的技术方案简单，避免调整培养箱内光照强度来对植物生长所需的光照进行弥补，基于该方法制备的培养皿可广泛应用于各种类型的组培箱中。
培养皿红光蓝光绿光吸收光谱光照植物组织培养技术植物组织培养双重问题植物组培结合组培养箱组培箱光源加热上盖制备应用优化吸收

[发明专利]一种基于密码子对使用频度的基因密码子优化方法-CN201610838127.X有效
发明人：李阳 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2016-09-21 - 公布日： 2019-04-05 - 主分类号： G16B20/00 文献下载
摘要：本发明提出了一种基于密码子对使用频度的基因密码子优化方法，本方案采用密码子对使用频度对目的基因进行优化，不光考虑单个密码子使用频度，同时考虑两个密码子联合使用情况，即：相邻密码子的关系，挑选物种中两个tRNA连用时频度较高的密码子对对目标基因进行优化起到关键作用。
一种基于密码子使用频度基因优化方法

[发明专利]一种自动分离基因编辑中T-DNA标签的转基因方法-CN201810783830.4在审
发明人：李阳;易良华 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2018-07-17 - 公布日： 2018-11-16 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及针对转基因农作物育种过程中的自动分离基因编辑中T‑DNA标签的转基因方法，该方法通过在T‑DNA中放入一个能造成种子发育干扰的表达元件，只要有T‑DNA标签的T1代种子就会发育异常，通过T1代种子形态自动分离基因编辑中T‑DNA标签。本发明的作物转基因是通过将一种转基因重组载体和目的基因靶点再重组，再重组后的载体转入目的农作物来实现的。该转基因重组载体中原始载体为具有筛选标签基因的Cas9载体、cpf1载体、talen载体或ZNF载体，重组载体携带有能转录产生干扰片段的表达元件，所述干扰片段能干扰抑制农作物种子发育。本发明的自动分离基因编辑中T‑DNA标签的转基因方法避免了大规模的分子检测，降低分子育种成本。
转基因自动分离重组载体基因转基因农作物发育农作物种子标签基因发育异常分子检测分子育种干扰抑制目的基因育种过程原始载体种子形态转录靶点农作物标签筛选转入携带

[发明专利]一种文献管理系统-CN201810438314.8在审
发明人：李阳;陈伟;张旺;王世阳;李思远 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2018-05-09 - 公布日： 2018-09-28 - 主分类号： G06F17/30 文献下载
摘要：本发明涉及一种文献管理系统，该系统包括：文献获取模块，用于通过网络获取方式和本地获取方式获取文献；数据存储模块，用于存储所述文献获取模块获得的所述文献；信息预警模块，用于根据用户预先设定的预警关键词从所述数据存储模块获取文献信息，并将所述文献信息通过所述用户预先设定的预警方式分发给所述用户；文献显示模块，用于显示所述文献；文献管理模块，用于收藏文献和对收藏的文献进行标签管理、笔记管理、收藏数据检索、重要性分级。本系统可以将用户所需要的文献主动推送给用户，并且为用户提供翻译和文献收藏管理功能。
数据存储模块文献管理系统文献获取文献信息收藏重要性分级笔记管理标签管理管理模块获取方式模块获得收藏管理数据检索网络获取显示模块信息预警用户提供预警方式分发存储预警翻译

[发明专利]一种消除植物组织培养器皿壁凝结水的方法-CN201610506694.5有效
发明人：李阳 -专利权人： 武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2016-07-01 - 公布日： 2018-09-11 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种消除植物组织培养器皿壁凝结水的方法，其包括培养装置；培养装置内设置有多层用于放置植物组织培养器皿的隔板；隔板的下端面固接有照明光源；位于隔板下端面的照明光源散发出的热量通过流经所述隔板内部的流体介质的热交换实现散热。本发明用流体散热的方式降低了培养架层板的温度，进一步的降低了培养器皿中的培养基温度使培养器皿下部温度低于上部温度低，根本上避免了水蒸气在器皿壁凝结，同时节约了组培室建造成本增大了空间利用率，较常规的气流循环更为精细，最大程度的保证了培养室温度均衡。
一种消除植物组织培养器皿凝结水方法

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