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[实用新型]一种实现ELISA简易操作的酶标板-CN202320071424.1有效
发明人：宋路红;王帅;赵杭娜 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2023-01-08 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种实现ELISA简易操作的酶标板，所述酶标板包括孔板本体和覆盖于孔板本体上的密封膜，所述孔板本体的孔内依次覆盖有待检测蛋白的捕获抗体层、蛋白保护层和糖胶保护膜，且在96孔内包含有待检测抗体和HRP酶的微球；所述密封膜上对应孔的位置均设置有注液开口。本实用新型的有益效果为：本实用新型所述一种实现ELISA简易操作的酶标板，将检测抗体或检测抗体偶联HRP酶制成均一的微球并预先放置于酶标板内，将TMB显色之前的操作整合为一步，将整体操作时长最短控制在90min内。
一种实现 elisa 简易操作酶标板

[发明专利]一种实现ELISA简易操作的方法-CN202310022937.8在审
发明人：宋路红;王帅;赵杭娜 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2023-01-08 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：本发明公开了一种实现ELISA简易操作的方法，包括以下步骤:S1、准备梯度稀释的待检测蛋白的标准品，同时对待测样本进行预稀释；S2、在酶标板上设置标准品孔和样本孔，分别各加入100μl稀释后的标准品和样本，孵育，弃去液体，拍干后洗涤；S3、向上述标准品孔和样本孔中分别加入100μlTMB显色底物，室温孵育，再向每孔中加入100μl终止液终止反应；S4、将上述酶标板放入酶标仪中进行双波长检测，根据标准品读取结果，绘制标准品的OD线，并计算出样本中目标物的浓度。本发明的有益效果为：本发明所述一种实现ELISA简易操作的方法，将检测抗体和/或HRP酶制成均一的微球并预先放置于酶标板内，将TMB显色之前的操作整合为一步，将整体操作时长最短控制在90min内。
一种实现 elisa 简易操作方法

[外观设计]试剂盒-CN202330010505.6有效
发明人：宋路红;王帅 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2023-01-08 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： 24-02 文献下载
摘要：1.本外观设计产品的名称：试剂盒。2.本外观设计产品的用途：用于化学检测用的试剂盒。3.本外观设计产品的设计要点：在于形状。4.最能表明设计要点的图片或照片：立体图1。
试剂盒

[发明专利]一种Annexin V凋亡检测的Binding Buffer及其制备方法-CN201910931952.8有效
发明人：郭爱龙 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2019-09-29 - 公布日： 2022-05-20 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种Annexin V凋亡检测的Binding Buffer及其制备方法，解决细胞分群不明显，染色指数低等问题；与市面上商品化Binding Buffer相比，本试剂可以明显提高染色指数，使细胞之间分群更明显。
一种 annexin 检测 binding buffer 及其制备方法

[发明专利]一种细胞因子检测试剂盒的开发方法-CN202111161454.3在审
发明人：宋路红 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2022-01-11 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞因子检测试剂盒的开发方法。本发明中，加入封闭液，使用涡旋振荡机对其进行涡旋振荡处理，之后使用超声震荡机对其进行超声震荡处理结束之后，取出离心液中的上清液，将其废弃不用；之后就可以结束标记抗体的过程；试产品各组分的形式及保存稳定性；测试各组分的保存形式，以及在2‑8度下的稳定性，未开封应至少保存18个月，开封后保存30天，从而完成细胞因子检测试剂盒的开发；实现自主标记微球、搭配组合检测因子，形成适应市场需求的产品，为进入临床市场打下基础，并在国内同行业中处于领先地位；与商品化的产品相比，在准确度、灵敏度、特异性、稳定性、检测因子数量等方面接近或达到国内外厂家的领先水平。
一种细胞因子检测试剂盒开发方法

[发明专利]一种淋巴细胞亚群的流式检测方法-CN202111162892.1在审
发明人：宋路红 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2022-01-11 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种淋巴细胞亚群的流式检测方法。本发明中，以量子点偶联产物荧光效率测定、偶联产物的免疫反应性测定和量子点偶联产物检测目的蛋白抗原的方式通过将荧光微球偶联抗体检测目的蛋白，从而达到了更加快速准确的检测方式，从而提高了检测速率，为人们的研究带来了更多的便利。流式细胞术整体表现出其快速，高灵敏度，高准确性和重复性的优势；灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统；高效：减少样本处理与生物源性污染接近生物体的分析条件：全血检测保留细胞及生化微环境更准确反映了体内状况，从而提高了试验数据的准确性，为后续的治疗监测研究提供了更专业准确的数据。
一种淋巴细胞检测方法

[发明专利]微球标记抗体的方法-CN202111164677.5在审
发明人：宋路红 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2022-01-11 - 主分类号： G01N33/532 文献下载
摘要：本发明公开了微球标记抗体的方法。本发明中，使用涡旋混合仪将微球充分振荡分散后，用流式进行微球计数。取适量微球，用加入50mM MES(pH5pH6.0)重悬洗涤，再重悬于含5mg/ml EDC、5mg/ml NHS的50mM MES(pH6.0)溶液沉淀，使用涡旋振荡机对其进行涡旋振荡处理，之后使用超声震荡机对其进行超声震荡处理结束之后，将微球溶液加入到离心机的内部，对其进行离心处理，离心过程结束之后，取出离心液中的上清液，将其废弃不用；之后使用清水再对溶液重复洗涤一次备用进行活化；用100mM MES(pH6.0)溶液洗涤后，加入100mM MES(pH6.0)溶液和适量捕获抗体，使抗体与微球进行偶联；加入250～～300μl封闭液重悬进行封闭，封闭液为99.88％PBS溶液、含0.1％BSA溶液和0.02％Tween20的PBS溶液，从而使微球表面空余的位点被BSA填满，检测抗体不会被非特异性的吸附到微球上，而只会跟特异性的目的蛋白结合，从而提高了检测的准确性。
标记抗体方法

[发明专利]一种IVD流式产品的开发方法-CN202111161453.9在审
发明人：宋路红 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2022-01-07 - 主分类号： G01N33/533 文献下载
摘要：本发明公开了一种IVD流式产品的开发方法。本发明中，测试样本的要求包括样本处理方法和抗凝血剂的种类，其中样本处理方法包括样本溶血处理，保存、转运的条件和方法；抗凝血剂包括EDTA、肝素钠、柠檬酸钠；如果用热电的载体蛋白用无菌水溶解；测试染色前和染色后的稳定性，同时联系测试机构测试市面上占有率较高的流式细胞仪，测试结束之后，即可以完成IVD流式产品的开发，取透析过夜的标记物，通过葡聚糖凝胶SephadexG‑25或G—50柱，分离游离荧光素；之后对收集标记的荧光抗体进行鉴定；从而可以鉴定处抗体是否被标记，从而提高了后续的IVD流式产品开发的准确度，提高了产品质量。
一种 ivd 产品开发方法

[发明专利]一种通过将荧光微球偶联抗体检测目的蛋白的方法-CN202111164659.7在审
发明人：宋路红 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2022-01-04 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过将荧光微球偶联抗体检测目的蛋白的方法。本发明中，进行抗体标记与纯化；在1.5mL的微量离心管中加入50μL的量子点，然后加入1OμLEDC和10μLsulfo—NHS溶液，加磷酸盐缓冲液补至800μL，不停地混合溶液，室温下反应20min；加入纯化的抗体200μL，37℃振荡反应2h；加入100μL甘氨酸，封闭量子点上未反应的羧基；将偶联反应所得到的产物4℃，12000r/min离心20min，所得沉淀即为纯化的偶联有荧光微球的P1目的蛋白抗体，以量子点偶联产物荧光效率测定、偶联产物的免疫反应性测定和量子点偶联产物检测目的蛋白抗原的方式通过将荧光微球偶联抗体检测目的蛋白，从而达到了更加快速准确的检测方式，从而提高了检测速率，为人们的研究带来了更多的便利。
一种通过荧光微球偶联抗体检测目的蛋白方法

[发明专利]一种Annexin V凋亡检测的阳性质控液及其制备方法-CN201910931602.1有效
发明人：郭爱龙 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2019-09-29 - 公布日： 2021-12-10 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种Annexin V凋亡检测的阳性质控液及其制备方法，应用于Annexin V或PI/7‑AAD单染，在正常收集的细胞中加入适量的阳性质控液，冰上孵育30分钟，即可使细胞死亡，再与等量的活细胞混合，可形成比例接近的活细胞和死细胞，Annexin V或PI/7‑AAD单染时，可检测到比例接近的阳性细胞群和阴性细胞群，可非常方便地用于仪器的补偿调节。操作简单、重复性好、方便补偿调节、保证结果的可靠性。
一种 annexin 检测阳性质控液及其制备方法

[发明专利]一种非肝素抗凝血液样本的Th检测方法-CN201910931637.5有效
发明人：黄振宇 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2019-09-29 - 公布日： 2021-11-26 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种非肝素抗凝血液样本的Th检测方法，使用淋巴细胞分离液对非肝素抗凝的样本进行处理，获得外周血单个核细胞(PBMC)，去除抗凝剂对细胞活化和细胞因子分泌的影响，同时在刺激/阻断阶段，加入血清，给细胞提供足够的营养物质；经抗体染色、固定破膜后，可成功用于Th细胞因子的检测，从而扩大了Th检测样本类型的范围。可使研究人员或检测人员充分利用样本进行Th检测，避免了因收集了非肝素抗凝的样本造成样本浪费和重复采集，大大提高了效率。
一种肝素抗凝血液样本 th 检测方法

[发明专利]一种藻红蛋白(PE)与Annexin V蛋白偶联方法-CN202011149769.1在审
发明人：郭爱龙 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2020-10-23 - 公布日： 2021-05-04 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明公开了一种藻红蛋白(PE)与Annexin V蛋白偶联方法，包括以下步骤：步骤1：Annexin V蛋白表达纯化：1.1：基因序列优化：查找人Annexin V蛋白的基因序列，将人Annexin V基因序列优化，去除终止密码子序列，将其连入原核表达载体pET28a上，保留前后His标签蛋白，为蛋白纯化及后续偶联荧光素纯化做准备；1.2：Annexin V蛋白诱导表达：挑取pET28a‑Annexin V质粒单菌落，接种到10ml含有50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中，37℃200rpm振荡培养过夜，按照1：100将培养的菌液接种到含50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中，37℃200rpm振荡培养至菌液浓度OD600为04‑0.6；本发明先通过分子筛纯化去除大部分游离的PE后再采用镍柱纯化浓缩，得到纯度较高的Annexin V‑PE标记物，且保持蛋白良好的生物活性，可用于细胞凋亡检测。
一种蛋白 pe annexin 方法

[发明专利]一种室温稳定的单组分TMB显色液及其制备方法-CN202011147863.3在审
发明人：周志鹏 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2020-10-23 - 公布日： 2021-02-26 - 主分类号： G01N33/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种室温稳定的单组分TMB显色液，包括以下组分：聚乙烯醇0.001g/L‑20g/L，阿拉伯糖0.16g/L‑30g/L，柠檬酸1mM‑100mM，乙二胺四乙酸二钠1mM‑20mM，30％过氧化氢水溶液1mM‑10mM，TMB 1mM‑3mM，DMSO 20ml/L‑30ml/L，Proclin300 0.04％，磷酸氢二钠1mM‑25mM，超纯水定容至1L。所述单组分TMB显色液采用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液，且缓冲液的pH值为3.1‑3.6。所述聚乙烯醇为1788低粘度型聚乙烯醇，且聚乙烯醇的聚合度为1700，醇解度为88％。一种室温稳定的单组分TMB显色液的制备方法，包括以下步骤：步骤一：试剂母液配制：1.1：50g/L低粘度聚乙烯醇1788配制：准确称取5g 1788低粘度型聚乙烯醇于烧杯中，加入适量超纯水，置于65℃恒温水浴锅中，通过玻璃棒持续搅拌使颗粒分散均匀，溶解后继续保温2小时，超纯水定容至100ml，使用0.45μm滤膜过滤。
一种室温稳定组分 tmb 显色及其制备方法

[发明专利]一种标准品稀释液的简易制备方法-CN202011147882.6在审
发明人：黄振宇 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2020-10-23 - 公布日： 2021-02-26 - 主分类号： G01N33/96 文献下载
摘要：本发明公开了一种标准品稀释液的简易制备方法，包括以下步骤：步骤一：在成分明确的缓冲液中，加入不同浓度的生化试剂，浓度范围为0％‑10％，浓度梯度为0.5％；步骤二：在各个浓度的标准品稀释液和若干待测样本中，加入等量高浓度的目标蛋白，加入目标蛋白的体积不超过整个体系的10％，并使加入目标蛋白的终浓度位于标曲范围的中段；步骤三：对加入目标蛋白后的标准品稀释液、加入目标蛋白后的待测样本以及不加目标蛋白的待测样本按常规ELISA实验方案操作；步骤四：绘制OD曲线：横坐标为不同浓度的标准品稀释液，纵坐标为OD值；本发明的标准品稀释液成分明确、制备方法相对简易，该配方的标准品稀释液不易长菌，具有突出性的进步。
一种标准稀释液简易制备方法

[发明专利]一种高灵敏度的单组分TMB显色液及其制备方法-CN202011149776.1在审
发明人：周志鹏 -专利权人： 杭州联科生物技术股份有限公司
申请日： 2020-10-23 - 公布日： 2021-02-26 - 主分类号： C12Q1/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种高灵敏度的单组分TMB显色液，包括以下组分：聚乙烯醇0.001g/L‑20g/L，木糖0.16g/L‑30g/L，柠檬酸1mM‑100mM，乙二胺四乙酸二钠1mM‑20mM，30％过氧化氢水溶液1mM‑10mM，TMB 1mM‑3mM，DMSO 20ml/L‑30ml/L，Proclin300 0.04％，磷酸氢二钠1mM‑25mM，超纯水定容至1L。一种高灵敏度的单组分TMB显色液的制备方法，包括以下步骤：步骤一：试剂母液配制：1.1：50g/L低粘度聚乙烯醇1788配制：准确称取5g 1788低粘度型聚乙烯醇于烧杯中，加入适量超纯水，置于65℃恒温水浴锅中，通过玻璃棒持续搅拌使颗粒分散均匀，溶解后继续保温2小时，超纯水定容至100ml，使用0.45μm滤膜过滤。本发明具有检测本底低的特点，有效提高了低浓度样本的检出率，不需要进行传统A液、B液的混合，为用户的操作提供了便利，使得本发明整体上具有突出性的进步。
一种灵敏度组分 tmb 显色及其制备方法

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