本发明涉及基因工程技术领域,具体而言,涉及一种重组载体质粒、水杨酸生物传感器及构建方法和应用。该载体质粒包括改造的NahR蛋白的编码基因、Pr启动子、报告标记蛋白的编码基因、改造的Psal启动子及质粒骨架;Pr启动子和改造的Psal启动子方向相反;改造的NahR蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示;改造的Psal启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。改造的Psal启动子与野生型相比,具有更强的感应效果。改造的NahR蛋白进一步提高生物传感器对水杨酸的响应灵敏度。该生物传感器,对水杨酸的相应灵敏度更高,降低了对水杨酸的检出限。