本申请公开了一种金钱鱼胶检测试剂及其应用。本申请金钱鱼胶检测试剂包括第一、第二引物探针组合;第一引物探针组合为黄唇鱼胶上下游引物和探针,上游引物为Seq ID No.1至3的任一序列,下游引物为Seq ID No.4至6的任一序列,探针为Seq ID No.7所示序列;第二引物探针组合为加利福尼亚湾石首鱼胶上下游引物和探针,上游引物为Seq ID No.8至10的任一序列,下游引物为Seq ID No.11至13的任一序列,探针为Seq ID No.14所示序列。本申请试剂能快速、准确的对黄唇鱼胶和加利福尼亚湾石首鱼胶进行现场检测,为执法检查提供有力科学依据,对两种鱼的生态保护具有重要意义。