本发明公开了一种无血清细胞冻存液,属于细胞培养领域。本发明所述的无血清冻存液组成为:CD培养基(化学成分限定培养基,Chemically Defined Media)90‑99%、细胞培养级二甲基亚砜(DMSO)1‑10%。这种冻存液不含有动物源血清,不会引入外源蛋白,降低了动物病源污染的可能性,冻存细胞复苏后活性可达到80%‑90%,细胞表型基本没有变化,从而保持了细胞复苏后的生理功能和生物学功能,可用于继续培养或临床直接回输。这种无血清冻存液安全有效,制备方法简单,成本可控,具有良好的临床应用前景。