本发明公开了一种眼镜蛇毒神经生长因子纯化制备方法,先采用DEAE CL‑6B阴离子交换柱然后再利用Sephadex G‑50凝胶层析柱、Macro‑prep High S阳离子交换柱依次进行分离,每次分离后采用PC12细胞检验法用超纯水对所收集的各峰稀释后进行检验选取蛇毒神经生长因子活性最高的峰作为下步分离的样品。其中,通过稀释测定NGF诱导PC12细胞分化的最小浓度,发明人找到了蛇毒分离过程中NGF的最高活性峰,并确定NGF诱导PC12细胞分化的最小浓度达到0.1μg/ml。试验表明,应用本发明可得到电泳纯的NGF,其纯度高、活性高。