本发明属于生物技术领域,公开了一种引物组和探针,包含核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑6所示的FIP、BIP、F3、B3、LoopF和LoopB组成的引物组以及如SEQ ID NO:7‑8所示的荧光探针probe和淬灭探针Quencher,该引物组能够对猪流行性腹泻病毒野毒株、疫苗株均进行扩增,对于野毒株的ORF3基因保守区域开发出荧光引物,用于进行荧光的特征性反应,实现了对猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的高特异性、敏感性的快速定量检测。同时,本发明还提供了一种试剂盒、检测猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的方法。
本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ的制备方法,制备方法包括:步骤一,VKVQ编码基因的克隆,根据鸡球虫基因序列设计上游引物SEQ ID NO:3和下游引物SEQ ID NO:4,进行PCR扩增、电泳得到一条约1200bp的片段,将该产物连接转化后得到序列全长为1245bp的VKVQ,其序列为SEQ ID NO:1以及后续相关步骤。该方法制备的疫苗通过免疫柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ真核表达质粒和原核表达蛋白,能有效控制鸡体感染柔嫩艾美耳球虫,大大降低养鸡场抗球虫药的使用量,有效控制鸡球虫病。