本发明提供了特异性鉴别阿胶及其原料中驴、马和骡源性成分的通用引物、检测方法及应用,属于动物种源性成分分子检测技术领域。本发明中所述的引物是指一对能同时特异性扩增驴特异性序列SEQ ID NO.1和马特异性序列SEQ ID NO.2的通用引物。本发明提供的检测方法可对PCR扩增产物进行电泳检测或高分辨率熔解分析,根据扩增片段大小或标准化熔解曲线和熔解峰图对驴、马和骡源性成分进行有效鉴定和区分。本发明为阿胶及其原料中驴、马和骡源性成分的快速鉴别提供了简便、高效、可靠的检测方法,为阿胶企业原料采购及其阿胶制品真实性保驾护航。