本发明公开了一种具有高热稳定性的PET水解酶IsPETase‑cSP突变酶及编码基因及工程菌，一种具有高热稳定性的PET水解酶IsPETase‑cSP突变酶，命名为IsPETaseS92P/D157A‑cSP，所述IsPETaseS92P/D157A‑cSP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，差式扫描荧光法测得其熔融温度大幅提升，热稳定性显著增强。使用IsPETaseS92P/D157A‑cSP降解PET膜，降解效果显著提高。
本发明公开了17β‑羟基类固醇羟化酶3突变酶及编码基因及工程菌，17β‑羟基类固醇羟化酶3突变酶简写为17β‑HSD3G186R/Y195W，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明采用理性设计技术对17β‑羟基类固醇羟化酶3进行分子改造，经多同源建模、分子对接、结合能计算等方法而获得与底物亲和力提高的17β‑羟基类固醇羟化酶3突变酶，酶活提高为原来的1.66倍，利用此策略可以显著提高17β‑羟基类固醇羟化酶3的催化活力。本发明的编码17β‑羟基类固醇羟化酶3突变酶使睾酮产量高达3.95g/L，为规模化的生物法制备睾酮这种雄性激素类药物提供技术支撑和数据参考。
本公开提供了一种工程菌株，该工程菌株是保藏编号为CGMCC NO.14820的大肠杆菌。本公开还提供了一种制备工程菌的方法，该方法包括：在工程菌宿主菌的基因组中敲入乙酸激酶后进行重组质粒的转入，使得转入后的所述工程菌宿主菌能够过表达乙酸激酶并且能够表达所述重组质粒中所插入的基因；所述重组质粒包括如SEQ ID NO.1所示的质粒、如SEQ ID NO.2所示的质粒和如SEQ ID NO.7所示的质粒。本公开还提供了该方法制备得到的工程菌、上述工程菌株和工程菌的用途以及一种利用纤维素制备金合欢烯的方法。本公开通过上述技术方案，显著地提高了利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯的产率。
本公开提供了一种工程菌株，该工程菌株是保藏编号为CGMCC NO.14821的大肠杆菌。本公开还提供了一种制备工程菌的方法，该方法包括：在工程菌宿主菌的基因组中敲入乙酸激酶后进行重组质粒的转入，使得转入后的所述工程菌宿主菌能够过表达乙酸激酶并且能够表达所述重组质粒中所插入的基因；所述重组质粒包括如SEQ ID NO.1所示的质粒、如SEQ ID NO.2所示的质粒和如SEQ ID NO.7所示的质粒。本公开还提供了该方法制备得到的工程菌、上述工程菌株和工程菌的用途以及一种利用纤维素制备金合欢烯的方法。本公开通过上述技术方案，显著地提高了利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯的产率。
本公开提供了一种工程菌株，该工程菌株是保藏编号为CGMCC NO.14819的大肠杆菌。本公开还提供了一种制备工程菌的方法，该方法包括：在工程菌宿主菌的基因组中敲入乙酸激酶后进行重组质粒的转入，使得转入后的所述工程菌宿主菌能够过表达乙酸激酶并且能够表达所述重组质粒中所插入的基因；所述重组质粒包括如SEQ ID NO.1所示的质粒、如SEQ ID NO.2所示的质粒和如SEQ ID NO.3所示的质粒。本公开还提供了该方法制备得到的工程菌、上述工程菌株和工程菌的用途以及一种利用纤维素制备金合欢烯的方法。本公开通过上述技术方案，显著地提高了利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯的产率。
