本发明公开了一种检测禾谷孢囊线虫的RPA引物和探针、试剂盒及应用，属于植物寄生线虫的检测领域。所述RPA引物和探针，其包括一对特异性引物HaRPA‑F3和HaRPA‑R3，以及一个探针Ha‑probe，其中，所述HaRPA‑F3和HaRPA‑R3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1‑2所示，所述Ha‑probe的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。利用上述RPA引物和探针建立了禾谷孢囊线虫的快速可视化检测方法，且灵敏度高，特异性强，整个检测过程可以在1小时内完成。因此，本发明RPA检测法是一种简单、快速、特异、灵敏度高和直观的方法，可以适用于在田间快速检测禾谷孢囊线虫。
