本发明公开了一种检测肿瘤代谢通路基因表达的引物组、PCR芯片及其检测方法。所述引物组、PCR芯片包括分别特异性扩增肿瘤代谢通路相关的168个基因的引物对,所述引物对序列依次如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.336所示;本发明通过对肿瘤代谢通路的168个基因的引物特异性进行验证和筛选,以及PCR扩增条件的优化,保证在同一扩增条件下可以同时扩增出所有目的基因的片段。本发明所述PCR芯片重复性好、准确度高的,操作简单,成本低廉,为发现肿瘤代谢通路异常基因表达及其与肿瘤表型的相关性提供了简便快捷准确的手段,具有重要的应用价值。