本发明属于生物医药领域,具体涉及一种用于同时检测多种耐药基因的引物探针系统、试剂盒及方法。首先,本发明公开了一种用于同时检测多种耐药基因的引物探针系统,包括核苷酸序列如SEQ ID N0:1‑24所示的核苷酸序列组。还公开了包括该引物系统的试剂盒,以及使用该引物系统或试剂盒进行耐药基因检测的方法。本发明公开的试剂盒支持高通量、快速、准确及超高灵敏度地检测6个细菌耐药基因,对中国人群进行筛查,能有效地起到准确诊断、耐药溯源、耐药控制等作用,从而减少抗生素使用量,降低耐药产生,在科研领域和临床上具有极高的应用价值。