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[发明专利]一种禽腺病毒精纯化的方法-CN201810359474.3有效
发明人：温素彦;陈瑞爱;张淑琼;马光明;宋二保;张华;徐家华;廖世昌;吴达兴 -专利权人：华南农业大学;肇庆大华农生物药品有限公司
申请日： 2018-04-20 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种禽腺病毒精纯化的方法，包括步骤如下：1.取在细胞瓶中培养的鸡胚细胞，进行病毒接种，并加入DMEM培养基，将细胞瓶置于37℃转瓶培养箱中继续培养，接毒后，收获瓶内所有的病毒细胞培养液，经离心后收集上清液；2.使用超滤膜包对步骤1所获得的上清液进行10‑40倍浓缩；3.通过G200分子筛层析填料对步骤2所得液体进行分子筛层析；4.使用超滤膜包对步骤3回收的病毒液进行3‑10倍浓缩；5.使用阴离子交换层柱对步骤4所得病毒液进行层析纯化；6.使用超滤膜包对步骤5回收的病毒液进行4‑10倍浓缩，得到纯化后的禽腺病毒。本发明的纯化方法可在保持病毒具有良好活性的前提下对病毒液中的杂蛋白进行高效纯化，方便病毒的后续生物学应用。
种禽病毒精纯方法

[发明专利]一种质粒粗提的简易方法-CN201710786499.7有效
发明人：陈瑞爱;徐家华;张淑琼;路静;廖世昌;吴达兴 -专利权人：肇庆大华农生物药品有限公司;华南农业大学
申请日： 2017-09-04 - 公布日： 2020-07-10 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种简易的质粒粗提的方法，具体为：在含有质粒的基因工程菌体中加入PBS溶液重悬；加入20～100ug/ml的RNA酶和1～10mg/ml的溶菌酶；搅拌混匀，搅拌速度为100～5000rpm/min，搅拌的时间为10～50min；反复冻融3～6次，每次冻融后，进行搅拌，搅拌速度和时间同上；3000～10000rpm/min离心20～60min，取上清液；向上清中加入乙醇，乙醇最终浓度为60～80％；混匀后在2～8℃放置10～60min；8000～12000rpm/min离心15～90min，收集沉淀；加入TE溶液，电泳检测。相对于传统方法，本发明提取质粒的方法能够规模化，提取量不受限制，适合产业化；提取仅仅需要反复冻融菌体、乙醇沉淀两个主要步骤，避免了有毒有害试剂的使用；能够提取菌体中80％以上的质粒。
一种质粒简易方法

[发明专利]一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法-CN201710787730.4有效
发明人：徐家华;陈瑞爱;路静;张淑琼;廖世昌;吴达兴 -专利权人：肇庆大华农生物药品有限公司;华南农业大学
申请日： 2017-09-04 - 公布日： 2020-07-10 - 主分类号： C07K16/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法，具体为：通过应用PK‑15细胞碎片及由不同动物血清包被的ELISA板与抗猪圆环病毒多克隆抗体在常温下培育，使抗猪圆环病毒多克隆抗体中的非特异性抗体与PK‑15细胞碎片及ELISA板中的抗原相结合，进而除去抗猪圆环病毒多克隆抗体中的部分非特异性抗体。本发明的方法可以有效降低抗猪圆环病毒多克隆抗体中的非特异性抗体含量。
一种减少圆环病毒克隆抗体中非特异性方法

[发明专利]一种猪圆环病毒繁殖培养基及其应用-CN201710283815.9有效
发明人：陈瑞爱;徐家华;刘郁夫;张舒琼;吴达兴;廖世昌 -专利权人：肇庆大华农生物药品有限公司;华南农业大学
申请日： 2017-04-26 - 公布日： 2020-06-09 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪圆环病毒繁殖培养基及其应用，包括按体积百分比计的以下成分：DMEM培养基84.5‑96.9％；非必须要氨基酸0.5‑2％；脂肪酸0.1‑1.5％；维生素溶液0.5‑2％；肽类物质溶液2‑10％；该应用为将培养基应用于猪圆环病毒的培养中，培养包括以下步骤：1)将PK‑15细胞经传代和培养；2)病毒繁殖结束后，离心去除细胞碎片；3)采用超滤的方式去除小分子蛋白质，收集被截流的浓缩液；4)使用分子筛层析方法分离猪圆环病毒，收集第一个蛋白质峰，得到猪圆环病毒；该培养基使用氨基酸、脂肪酸、小肽等物质等替代血清，有利于提高病毒与在繁殖过程中产生的杂蛋白分离度，提高圆环灭活疫苗的品质。
种猪圆环病毒繁殖培养基及其应用

[发明专利]一种牛血清质量评价的方法-CN201710283822.9有效
发明人：徐家华;陈瑞爱;刘郁夫;路静;张舒琼;吴达兴;廖世昌 -专利权人：肇庆大华农生物药品有限公司;华南农业大学
申请日： 2017-04-26 - 公布日： 2018-12-21 - 主分类号： G01N33/96 文献下载
摘要：本发明公开一种牛血清质量评价方法，包括以下步骤：1)消化：使用0.25％EDTA‑胰酶溶液消化细胞，分散成单个细胞；2)加培养基：取两份单个细胞，分别加入含5％被评价牛血清的培养基10mL，混匀；3)进行1000、10000、10000倍稀释，加至96孔细胞板；4)挑选出含有单个细胞的孔；5)计数：分别在48h、72h、96h计数。该方法可以避免由于牛血清浓度差异导致细胞增殖不好，能快速高效地筛选出高品质牛血清。
种牛血清质量评价方法